苹果酸脱氢酶

一、产品介绍

二、酶活测定方法

1.     原理

                              malate dehydrogenase

Oxaloacetate + NADH + H⁺     ———→     L-Malate  + NAD⁺

2. 酶活定义

1个酶活单位等于在以下反应条件下1分钟生成1微摩尔NAD⁺所用的酶量。

3. 检测方法

3.1样品稀释液的配制

在800毫升去离子水中，加入5.8克Tris、20克L-天冬氨酸、1.5克 EDTA的二钾盐，2克牛血清白蛋白，搅拌溶解，用氢氧化钾溶液调节pH到7.50，定容至1升。

3.2酶活检测试剂配制方法

3.2.1 配制 A液

A液为0.1M的 pH为7.50的磷酸钾缓冲液。

3.2.2配制B液（草酰乙酸溶液）

    在冰水浴中，取100毫升A液，其中加入200mg草酰乙酸，搅拌溶解。此液极其不稳定，需要新鲜配制，当天配制当天使用，并且要放置在冰水中。

3.2.3配制C液（NADH溶液）

取A液100毫升，在其中加入0.6毫摩尔的NADH,搅拌溶解。此液需要当天配制当天使用，并且要放置在冰水浴中。

3.2.4待测样品的配制

检测前用卧氏称量管称量所需酶。称量时，应至少称量10mg的酶，以保证称量的准确性。用酶稀释液溶解，定容到配制体积。

3.2.5酶活检测步骤

用岛津分光度计依次加入A液0.840ml、B液0.030ml、C液0.030ml，混匀，保温2分钟，使反应体系温度达到30度，再加入0.015ml待测样品，混匀。在340nm条件下检测15-55秒的吸光度变化。K值为9807。该检测方法的线性是800-8000U/L。

3.2.6酶活力计算公式

酶活力（U/L）=  △A/min×Vt× D×1000  =△A/min×9807×D

ε×Vs×d