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苹果酸脱氢酶

天门冬氨酸转移酶/二氧化碳生化试剂盒原料 AST/CO2AssayKitMaterial
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产品描述
产品参数
英文名称
Malate Dehydrogenase
缩写
MDH
货号
AA0029A
规格
规格可定制

 

一、产品介绍

外观:

白色的无定形粉末

比 活 性:

≥15.0U/mg

稳 定 性:

-20至少稳定一年

分 子 量:

大约40KD

等 电 点:

5.6

米氏常数:

4.7x10-5M (L-Malate), 6.4x10-5M (Oxaloacetate),

2.5x10-5M (NADH)

抑 制 剂:

不受叠氮钠的抑制

pH稳定性

5.09.0                                         (Fig 4-1)

最 适 pH

6.0左右                                         (Fig4-2)

最适温度:

40℃                                            (Fig4-3)

热稳定性:

50以下稳定                                    (Fig4-4)

二、酶活测定方法

1.     原理

                              malate dehydrogenase


Oxaloacetate + NADH + H+     ———→     L-Malate  + NAD+

2. 酶活定义

1个酶活单位等于在以下反应条件下1分钟生成1微摩尔NAD+所用的酶量。

3. 检测方法

3.1样品稀释液的配制

800毫升去离子水中,加入5.8Tris20L-天冬氨酸、1.5 EDTA的二钾盐,2克牛血清白蛋白,搅拌溶解,用氢氧化钾溶液调节pH7.50,定容至1升。

3.2酶活检测试剂配制方法

3.2.1 配制 A

A液为0.1M pH7.50的磷酸钾缓冲液。

3.2.2配制B液(草酰乙酸溶液)

    在冰水浴中,取100毫升A液,其中加入200mg草酰乙酸,搅拌溶解。此液极其不稳定,需要新鲜配制,当天配制当天使用,并且要放置在冰水中。

3.2.3配制C液(NADH溶液)

A100毫升,在其中加入0.6毫摩尔的NADH,搅拌溶解。此液需要当天配制当天使用,并且要放置在冰水浴中。

3.2.4待测样品的配制

检测前用卧氏称量管称量所需酶。称量时,应至少称量10mg的酶,以保证称量的准确性。用酶稀释液溶解,定容到配制体积。

3.2.5酶活检测步骤

用岛津分光度计依次加入A0.840mlB0.030mlC0.030ml,混匀,保温2分钟,使反应体系温度达到30度,再加入0.015ml待测样品,混匀。在340nm条件下检测15-55秒的吸光度变化。K值为9807。该检测方法的线性是800-8000U/L

3.2.6酶活力计算公式

 

酶活力(U/LA/min×Vt× D×1000  =A/min×9807×D

ε×Vs×d

 

 

Vt

:反应液总体积     0.915ml

ε

:摩尔吸光系数

Vs

:待测酶液的体积   0.015ml

d

:比色杯光径       1cm

D

:稀释倍数

A/min

A/min(待检样品) A/min(空白)(单位:ABS/min

 

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