一、产品介绍
外观: |
白色的无定形粉末 |
比 活 性: |
≥15.0U/mg |
稳 定 性: |
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分 子 量: |
大约40KD |
等 电 点: |
5.6 |
米氏常数: |
4.7x10-5M (L-Malate), 6.4x10-5M (Oxaloacetate),
2.5x10-5M (NADH) |
抑 制 剂: |
不受叠氮钠的抑制 |
pH稳定性: |
5.0~9.0 (Fig 4-1) |
最 适 pH: |
6.0左右 (Fig4-2) |
最适温度: |
40℃ (Fig4-3) |
热稳定性: |
50℃以下稳定 (Fig4-4) |
二、酶活测定方法
1. 原理
malate dehydrogenase
Oxaloacetate + NADH + H+ ———→ L-Malate + NAD+
2. 酶活定义
1个酶活单位等于在以下反应条件下1分钟生成1微摩尔NAD+所用的酶量。
3. 检测方法
3.1样品稀释液的配制
在800毫升去离子水中,加入5.8克Tris、20克L-天冬氨酸、1.5克 EDTA的二钾盐,2克牛血清白蛋白,搅拌溶解,用氢氧化钾溶液调节pH到7.50,定容至1升。
3.2酶活检测试剂配制方法
3.2.1 配制 A液
A液为0.1M的 pH为7.50的磷酸钾缓冲液。
3.2.2配制B液(草酰乙酸溶液)
在冰水浴中,取100毫升A液,其中加入200mg草酰乙酸,搅拌溶解。此液极其不稳定,需要新鲜配制,当天配制当天使用,并且要放置在冰水中。
3.2.3配制C液(NADH溶液)
取A液100毫升,在其中加入0.6毫摩尔的NADH,搅拌溶解。此液需要当天配制当天使用,并且要放置在冰水浴中。
3.2.4待测样品的配制
检测前用卧氏称量管称量所需酶。称量时,应至少称量10mg的酶,以保证称量的准确性。用酶稀释液溶解,定容到配制体积。
用岛津分光度计依次加入A液0.840ml、B液0.030ml、C液0.030ml,混匀,保温2分钟,使反应体系温度达到30度,再加入0.015ml待测样品,混匀。在340nm条件下检测15-55秒的吸光度变化。K值为9807。该检测方法的线性是800-8000U/L。
酶活力(U/L)= △A/min×Vt× D×1000 =△A/min×9807×D
ε×Vs×d
Vt |
:反应液总体积 (0.915ml) |
ε |
:摩尔吸光系数 |
Vs |
:待测酶液的体积 (0.015ml) |
d |
:比色杯光径 ( |
D |
:稀释倍数 |
△A/min |
:△A/min(待检样品) -△A/min(空白)(单位:ABS/min)
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IVD原料