β-半乳糖苷酶

一、产品介绍

 二、酶活测定方法

1.     检测原理

2.     酶活定义

一个酶活单位等于在检测条件下每分钟转换(水解) 1.0μmol底物（O-硝基酚β-D-半乳糖苷）的酶量。

3.     检测方法

3.1   酶活检测试剂配制方法

3.1.1        试剂A的配制

100mM，pH 7.3的磷酸钠缓冲液。

3.1.2        试剂B的配制

3.36M β-巯基乙醇：将4ml β-巯基乙醇用水稀释至17ml（现配现用）。

3.1.3        试剂C的配制

30mM 氯化镁溶液：将610mg MgCl₂·H₂O溶于80ml水，使用1M NaOH调pH至7.3，定溶至100ml。

3.1.4        试剂D的配制

22.7mM O-硝基酚β-D-半乳糖苷溶液：将137mg ONPG溶于20ml试剂A（0-5℃可保存1周）。

3.1.1        试剂E的配制

测活试剂：将试剂A，试剂B，试剂C按照8：1：1的比例混合。

3.1.2        试剂F（酶稀释液）的配制

酶稀释液：50mM pH7.3的磷酸钠缓冲液，含1.0mM MgCl₂，0.1% BSA。

3.1  待测样品的配制

检测前用卧氏称量管称量所需酶，酶称量时，应至少称量10毫克的酶，以保证称量的准确性。用酶稀释液溶解，定容到配制体积，室温放置1小时。测定前使用酶稀释液(F)稀释至100-1000U/L。

3.2  酶活检测步骤

1、0.520ml试剂E与0.02ml稀释好的酶液在37℃保温1分钟。

2、加入0.06ml试剂D，37℃反应4分钟。记录吸光值，计算第3分钟到第4分钟的单位时间吸光度变化（△OD₄₀₅/min _（test））。

3、重复第1、2步骤，用20微升的酶稀释液代替酶液。计算单位时间吸光值变化（△OD₄₀₅/min _（blank））。

注意：此法酶的最适线性为100-1000 U /L。

3.3  酶活力计算公式

酶活力（U/L）= 

酶比活力（U/mg）= 

 三、 附图