一、产品介绍
外观: |
灰白色无定形粉末 |
比 活 性: |
≥150U/mg |
稳 定 性: |
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分 子 量: |
大约55KD |
等 电 点: |
4.8 |
米氏常数: |
1.09x10-4M(G-6-P),1.4x10-4M(NAD+) |
抑 制 剂: |
不受叠氮钠的抑制 |
pH稳定性: |
5.0~10.5 (Fig.4-1) |
最 适pH: |
8.5 (Fig.4-2) |
最适温度: |
55℃以上 (Fig.4-3) |
热稳定性: |
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二、 酶活测定方法
1、 原理:
2、酶活定义:
1个酶活单位等于在以下反应条件下1分钟内转化1微摩尔NAD形成NADH所需要的酶量。
3. 检测方法
3.1 样品稀释液的配制
配制0.05M,pH7.5的Tris-HCl缓冲液,缓冲液中添加0.1%牛血清白蛋白。
3.2 酶活检测试剂配制方法
试剂A:配制0.05M,pH7.8的Tris-HCl缓冲液,缓冲液液中添加含0.0033M的氯化镁。
试剂B:配制浓度为60mM 的NAD+溶液 (现用现配)。
试剂C:配制0.1M的葡萄糖-6-磷酸溶液(现用现配)
3.3待测样品的配制
检测前用卧氏称量管称量所需酶,酶称量时,应至少称量10mg的酶,以保证称量的准确性。用酶稀释液溶解,定容到配制体积。根据理论酶活,用样品稀释液将样品储备液稀释至50-200 U/L
3.4 酶活检测步骤
测定前将试剂放入冰水浴中,降温到30度以下。
按比例依次加入以下试剂:2.7ml的试剂A、0.1ml的试剂B、0.1ml的试剂C,30℃预热300秒,加待测酶液0.1ml(空白对照取0.1毫升酶稀释液),在340nm测定加样后4-5分钟之间的吸光度变化率。此法酶的线性为60-200U/L,检测时用该浓度区段的标本进行检测。
3.5 酶活力计算公式
酶活力(U/L)= △A/min×Vt× D×1000 =△A/min×4820×D
6.22×Vs×d
Vt |
:反应液总体积 (ml) |
ε |
:NADH摩尔吸光系数 6.22 (cm2/micromole) |
Vs |
:待测酶液的体积 (ml) |
d |
:比色杯光径 (cm) |
D |
:稀释倍数 |
△A/min |
:△A/min(待检样品) -△A/min(空白)(单位:ABS/min) |
三. 附图
IVD原料