一、产品介绍
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外观： |
灰白色无定形粉末 |
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比 活 性： |
≥150U/mg |
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稳 定 性： |
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分 子 量： |
大约55KD |
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等 电 点： |
4.8 |
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米氏常数： |
1.09x10-4M（G-6-P），1.4x10-4M（NAD+） |
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抑 制 剂： |
不受叠氮钠的抑制 |
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pH稳定性： |
5.0～10.5 （Fig.4-1） |
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最 适pH： |
8.5 （Fig.4-2） |
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最适温度： |
55℃以上 （Fig.4-3） |
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热稳定性： |
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二、 酶活测定方法
1、 原理：
2、酶活定义：
1个酶活单位等于在以下反应条件下1分钟内转化1微摩尔NAD形成NADH所需要的酶量。
3. 检测方法
3.1 样品稀释液的配制
配制0.05M，pH7.5的Tris-HCl缓冲液，缓冲液中添加0.1%牛血清白蛋白。
3.2 酶活检测试剂配制方法
试剂A：配制0.05M，pH7.8的Tris-HCl缓冲液，缓冲液液中添加含0.0033M的氯化镁。
试剂B：配制浓度为60mM 的NAD+溶液 (现用现配)。
试剂C：配制0.1M的葡萄糖-6-磷酸溶液（现用现配）
3.3待测样品的配制
检测前用卧氏称量管称量所需酶，酶称量时，应至少称量10mg的酶，以保证称量的准确性。用酶稀释液溶解，定容到配制体积。根据理论酶活，用样品稀释液将样品储备液稀释至50-200 U/L
3.4 酶活检测步骤
测定前将试剂放入冰水浴中，降温到30度以下。
按比例依次加入以下试剂：2.7ml的试剂A、0.1ml的试剂B、0.1ml的试剂C，30℃预热300秒，加待测酶液0.1ml（空白对照取0.1毫升酶稀释液），在340nm测定加样后4-5分钟之间的吸光度变化率。此法酶的线性为60-200U/L，检测时用该浓度区段的标本进行检测。
3.5 酶活力计算公式
酶活力（U/L）= △A/min×Vt× D×1000 =△A/min×4820×D
6.22×Vs×d
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Vt |
：反应液总体积 （ml） |
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ε |
：NADH摩尔吸光系数 6.22 （cm2/micromole） |
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Vs |
：待测酶液的体积 （ml） |
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d |
：比色杯光径 (cm) |
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D |
：稀释倍数 |
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△A/min |
：△A/min（待检样品） －△A/min（空白）（单位：ABS/min） |
三. 附图
IVD原料