S-腺苷同型半胱氨酸水解酶

一、产品介绍

二、酶活测定方法

1.     检测原理

2.     酶活定义

一个酶活单位等于在检测条件下每分钟生成1.0mmol TNB的酶量。

3.     检测方法

3.1   酶活检测试剂配制方法

3.1.1        试剂A的配制

50mM磷酸钾、4mM EDTA-Na缓冲液，使用KOH调pH至pH8.0。

3.1.2        试剂B的配制

0.1M  NAD储存液：将NAD溶于试剂A，终浓度为100mM。

3.1.3        试剂C的配制

5mM S-腺苷同型半胱氨酸(SAH)储存液：将S-腺苷同型半胱氨酸溶于试剂A，终浓度为5mM，该试剂不稳定，需先用现配。

3.1.1        试剂D的配制

10mM DTNB：将DTNB（ 5,5V-dithiobis-2-nitrobenzoate）溶于无水乙醇，至终浓度10mM。

3.1.2        试剂E的配制

将0.4ml试剂B和0.2ml试剂C、0.2ml试剂C加至9.2ml 试剂A中，即为测活试剂。

3.1.3        试剂F（酶稀释液）的配制

酶稀释液：20mM PB，100mM NaCl，1mM EDTA，1mM NAD，1% 海藻糖，10%甘油，调pH至7.6。

3.1  待测样品的配制

检测前用卧氏称量管称量所需酶，酶称量时，应至少称量10毫克的酶，以保证称量的准确性。用酶稀释液溶解，定容到配制体积。测定前使用酶稀释液(F)稀释至150-400U/L。

3.2  酶活检测步骤

1、加入0.990ml试剂E在37℃保温2分钟。

2、加入0.010ml稀释好的酶液，37℃反应3分钟。记录吸光值，计算第2分钟的单位时间吸光度变化（△OD₄₁₂/min_（test））。

3、重复第1、2步骤，用10微升的酶稀释液代替酶液。计算单位时间吸光值变化（△OD₄₁₂/min_（blank））。

注意：此法酶的最适线性为150-400 U /L。

3.3  酶活力计算公式

酶活力（U/L）= 

酶比活力（U/mg）=

三、 附图