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腺苷脱氨酶

同型半胱氨酸(循环酶法)试剂盒原料HCYAssayKitMaterial
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产品描述
产品参数
英文名称
Adenosine Deaminase
缩写
ADA
货号
AA0001C
规格
规格可定制

 

一、产品介绍

外观:

白色无定形粉末

比 活 性:

≥10U/mg

稳 定 性:

-20至少稳定一年

分 子 量:

大约40KD

等 电 点:

5.4

抑 制 剂:

不受叠氮钠的抑制

pH稳定性

5.09.525℃24hr.                                 Fig.3-1

最 适 pH

7.0                                                Fig.3-2

最适温度:

 50                                              Fig.3-3

热稳定性:

70以下稳定(15min.)                               Fig.3-4

二、酶活测定方法

1.     原理

腺苷在腺苷脱氨酶的作用下生成次黄苷和氨,在265nm波长条件下测定腺苷浓度的变化可以测得酶活。

2.     酶活定义

1个酶活单位等于在以下检测条件下,1分钟内水解1微摩尔的腺苷所需要的腺苷脱氨酶的酶量。

3.     检测方法

3.1   试剂配制

3.1.1        1摩尔氢氧化钾溶液:56.1克氢氧化钾,溶于1000毫升去离子水中混匀。

3.1.2        100mM磷酸钾缓冲液(pH7.50

    13.609克磷酸二氢钾溶于800毫升去离子水,用1M的氢氧化钾调节pH7.5025),加去离子水定容到1000毫升。

3.1.3        酶稀释液的配制

100毫升100mM磷酸钾缓冲液(pH7.50)中,加入0.1克牛血清白蛋白溶解,混合均匀。

3.1.4        腺苷溶液(2mM)

    称量0.027克腺苷,溶于30毫升去离子水,用10mM的氢氧化钠调节pH7.0,定容到50毫升。4保存。

3.2   酶活的检测

3.2.1        待测样品的配制

检测前用卧氏称量管称量所需酶,酶称量时,应至少称量10mg的酶,以保证称量的准确性。用酶稀释液溶解,定容到配制体积。

1.1.1        酶活检测步骤

比色杯中按比例依次加入以下试剂:0.650毫升去离子水、0.750毫升100mM的磷酸钾缓冲液(pH7.50)、50微升腺苷溶液,混匀。25度条件下保温3分钟,加50微升待测样品,迅速混匀,在265nm波长下读取20-50秒的吸光度变化率,按照以下公式计算酶活力。此检测法的线性范围是50-1000U/L

    

     酶活力计算公式

酶活力(U/LA/min×Vt× D×1000  =A/min×3704×D

ε×Vs×d

 

Vt

:反应液总体积 ml

ε

:摩尔吸光系数  8.1  cm2/micromole

Vs

:待测酶液的体积  (ml)

d

:比色杯光径  (1cm)

D

:稀释倍数

A/min

A/min(待检样品) A/min(空白)(单位:ABS/min

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