腺苷脱氨酶

一、产品介绍

二、酶活测定方法

1.     原理

腺苷在腺苷脱氨酶的作用下生成次黄苷和氨，在265nm波长条件下测定腺苷浓度的变化可以测得酶活。

2.     酶活定义

1个酶活单位等于在以下检测条件下，1分钟内水解1微摩尔的腺苷所需要的腺苷脱氨酶的酶量。

3.     检测方法

3.1   试剂配制

3.1.1        1摩尔氢氧化钾溶液：56.1克氢氧化钾，溶于1000毫升去离子水中混匀。

3.1.2        100mM磷酸钾缓冲液（pH7.50）

    13.609克磷酸二氢钾溶于800毫升去离子水，用1M的氢氧化钾调节pH到7.50（25℃），加去离子水定容到1000毫升。

3.1.3        酶稀释液的配制

在100毫升100mM磷酸钾缓冲液（pH7.50）中，加入0.1克牛血清白蛋白溶解，混合均匀。

3.1.4        腺苷溶液(2mM)

    称量0.027克腺苷，溶于30毫升去离子水，用10mM的氢氧化钠调节pH至7.0，定容到50毫升。4℃保存。

3.2   酶活的检测

3.2.1        待测样品的配制

检测前用卧氏称量管称量所需酶，酶称量时，应至少称量10mg的酶，以保证称量的准确性。用酶稀释液溶解，定容到配制体积。

1.1.1        酶活检测步骤

比色杯中按比例依次加入以下试剂：0.650毫升去离子水、0.750毫升100mM的磷酸钾缓冲液（pH7.50）、50微升腺苷溶液，混匀。25度条件下保温3分钟，加50微升待测样品，迅速混匀，在265nm波长下读取20-50秒的吸光度变化率，按照以下公式计算酶活力。此检测法的线性范围是50-1000U/L。

     酶活力计算公式

酶活力（U/L）=  △A/min×Vt× D×1000  =△A/min×3704×D

ε×Vs×d