一、产品介绍
外观: |
白色无定形粉末 |
比 活 性: |
≥10U/mg |
稳 定 性: |
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分 子 量: |
大约40KD |
等 电 点: |
5.4 |
抑 制 剂: |
不受叠氮钠的抑制 |
pH稳定性: |
5.0~9.5(25℃,24hr.) (Fig.3-1) |
最 适 pH: |
7.0 (Fig.3-2) |
最适温度: |
50℃ (Fig.3-3) |
热稳定性: |
70℃以下稳定(15min.) (Fig.3-4) |
二、酶活测定方法
1. 原理
腺苷在腺苷脱氨酶的作用下生成次黄苷和氨,在265nm波长条件下测定腺苷浓度的变化可以测得酶活。
2. 酶活定义
1个酶活单位等于在以下检测条件下,1分钟内水解1微摩尔的腺苷所需要的腺苷脱氨酶的酶量。
3. 检测方法
3.1 试剂配制
3.1.1 1摩尔氢氧化钾溶液:56.1克氢氧化钾,溶于1000毫升去离子水中混匀。
3.1.2 100mM磷酸钾缓冲液(pH7.50)
13.609克磷酸二氢钾溶于800毫升去离子水,用1M的氢氧化钾调节pH到7.50(25℃),加去离子水定容到1000毫升。
3.1.3 酶稀释液的配制
在100毫升100mM磷酸钾缓冲液(pH7.50)中,加入0.1克牛血清白蛋白溶解,混合均匀。
3.1.4 腺苷溶液(2mM)
称量0.027克腺苷,溶于30毫升去离子水,用10mM的氢氧化钠调节pH至7.0,定容到50毫升。4℃保存。
3.2 酶活的检测
3.2.1 待测样品的配制
检测前用卧氏称量管称量所需酶,酶称量时,应至少称量10mg的酶,以保证称量的准确性。用酶稀释液溶解,定容到配制体积。
1.1.1 酶活检测步骤
比色杯中按比例依次加入以下试剂:0.650毫升去离子水、0.750毫升100mM的磷酸钾缓冲液(pH7.50)、50微升腺苷溶液,混匀。25度条件下保温3分钟,加50微升待测样品,迅速混匀,在265nm波长下读取20-50秒的吸光度变化率,按照以下公式计算酶活力。此检测法的线性范围是50-1000U/L。
酶活力计算公式
酶活力(U/L)= △A/min×Vt× D×1000 =△A/min×3704×D
ε×Vs×d
Vt |
:反应液总体积 (ml) |
ε |
:摩尔吸光系数 8.1 (cm2/micromole) |
Vs |
:待测酶液的体积 (ml) |
d |
:比色杯光径 ( |
D |
:稀释倍数 |
△A/min |
:△A/min(待检样品) -△A/min(空白)(单位:ABS/min) |
IVD原料