一、 产品介绍
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外观： |
灰棕色无定形粉末 |
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比 活 性： |
≥130.0U/mg |
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稳 定 性： |
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分 子 量： |
大约28KD |
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等 电 点： |
4.70 |
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米氏常数： |
5 x 10-2M (肌酐) |
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抑 制 剂： |
不受叠氮钠的抑制 |
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pH稳定性： |
6.0～10.0 （Fig. 3-1） |
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最 适 pH： |
8.0 （Fig. 3-2） |
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最适温度： |
45℃ （Fig. 3-3） |
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热稳定性： |
65℃以下 （Fig. 3-4） |
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稳 定 剂： |
Mg2+ |
二、 酶活测定方法
1. 原理
2. 酶活定义
1个酶活单位等于在以下反应条件下，1分钟生成1微摩尔橙色染料所用的酶量。
3. 检测方法
3.1酶稀释液的配制
1升50毫摩尔的磷酸钾缓冲液（pH7.50），加2毫摩尔氯化镁，搅拌溶解后，加牛血清白蛋白1克搅拌溶解。
3.2酶活检测试剂配制方法
A液(0.1M肌酸溶液)：取100ml pH7.5、500mM的磷酸钾缓冲液，加入1.49克的肌酸；
B液：浓度为0.5M的NaOH溶液；
C液：浓度为1.0％（W/V）的苦味酸溶液。
3.3待测样品的配制
检测前用卧氏称量管称量所需酶。称量时，应至少称量10mg的酶，以保证称量的准确性。用酶稀释液溶解，定容到配制体积。根据理论酶活，用酶稀释液将样品稀释至1.8U/ml～2.4 U/ml之间。酶经过稀释液稀释后应该立即测定。
3.4 酶活检测步骤
取A液1ml于37℃平衡5分钟，加入0.1ml待测样品混合均匀，于37℃反应10分钟；立刻取0.1ml加入到预先准备好的2ml的氢氧化钠（B液）中；加入1ml苦味酸溶液（C液），于25℃保温20分钟；空白：以酶稀释液为样品，在520nm测定以上溶液的OD值。
本法的线性范围为：1.8U/ml～2.4 U/ml（酶活计算公式见“3.5”）。
3.5 酶活力计算公式
酶活力（U/mL）= △A/min×Vt×11×D =△A/min×7.33×D
ε ×1.0×t×Vs
比活力（U/mg）=(U/mL）×1/C
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Vt |
：显色总体积 （3.1ml） |
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ε |
：摩尔吸光系数 4.65 (cm2/micromole) |
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Vs
11 |
：待测酶液的体积 （0.1ml）
: 反应液体积（1.1ml）/试样体积（0.1ml） |
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1.0
t |
：比色杯光径 (cm）
: 反应时间 (min) |
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D |
：酶液稀释倍数 |
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△A/min
C |
：△A/min（待检样品） －△A/min（空白） （单位：ABS/min）
：酶在稀释液中的浓度 （mg/ml） |
三、 附图
IVD原料