一、 产品介绍
外观: |
灰棕色无定形粉末 |
比 活 性: |
≥130.0U/mg |
稳 定 性: |
|
分 子 量: |
大约28KD |
等 电 点: |
4.70 |
米氏常数: |
5 x 10-2M (肌酐) |
抑 制 剂: |
不受叠氮钠的抑制 |
pH稳定性: |
6.0~10.0 (Fig. 3-1) |
最 适 pH: |
8.0 (Fig. 3-2) |
最适温度: |
45℃ (Fig. 3-3) |
热稳定性: |
65℃以下 (Fig. 3-4) |
稳 定 剂: |
Mg2+ |
二、 酶活测定方法
1. 原理
2. 酶活定义
1个酶活单位等于在以下反应条件下,1分钟生成1微摩尔橙色染料所用的酶量。
3. 检测方法
3.1酶稀释液的配制
1升50毫摩尔的磷酸钾缓冲液(pH7.50),加2毫摩尔氯化镁,搅拌溶解后,加牛血清白蛋白1克搅拌溶解。
3.2酶活检测试剂配制方法
A液(0.1M肌酸溶液):取100ml pH7.5、500mM的磷酸钾缓冲液,加入1.49克的肌酸;
B液:浓度为0.5M的NaOH溶液;
C液:浓度为1.0%(W/V)的苦味酸溶液。
3.3待测样品的配制
检测前用卧氏称量管称量所需酶。称量时,应至少称量10mg的酶,以保证称量的准确性。用酶稀释液溶解,定容到配制体积。根据理论酶活,用酶稀释液将样品稀释至1.8U/ml~2.4 U/ml之间。酶经过稀释液稀释后应该立即测定。
3.4 酶活检测步骤
取A液1ml于37℃平衡5分钟,加入0.1ml待测样品混合均匀,于37℃反应10分钟;立刻取0.1ml加入到预先准备好的2ml的氢氧化钠(B液)中;加入1ml苦味酸溶液(C液),于25℃保温20分钟;空白:以酶稀释液为样品,在520nm测定以上溶液的OD值。
本法的线性范围为:1.8U/ml~2.4 U/ml(酶活计算公式见“3.5”)。
3.5 酶活力计算公式
酶活力(U/mL)= △A/min×Vt×11×D =△A/min×7.33×D
ε ×1.0×t×Vs
比活力(U/mg)=(U/mL)×1/C
Vt |
:显色总体积 (3.1ml) |
ε |
:摩尔吸光系数 4.65 (cm2/micromole) |
Vs
11 |
:待测酶液的体积 (0.1ml)
: 反应液体积(1.1ml)/试样体积(0.1ml) |
1.0
t |
:比色杯光径 (cm)
: 反应时间 (min) |
D |
:酶液稀释倍数 |
△A/min
C |
:△A/min(待检样品) -△A/min(空白) (单位:ABS/min)
:酶在稀释液中的浓度 (mg/ml) |
三、 附图
IVD原料