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肌酐酶

肌酐(肌氨酸氧化酶法)试剂盒原料CREAssayKitMaterial
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产品描述
产品参数
英文名称
Creatinine Amidohydrolase
缩写
CAH
货号
AA0057B
规格
规格可定制

 

一、      产品介绍

外观:

灰棕色无定形粉末

比 活 性:

≥130.0U/mg

稳 定 性:

-20至少稳定一年

分 子 量:

大约28KD

等 电 点:

4.70

米氏常数:

5 x 10-2M  (肌酐)

抑 制 剂:

不受叠氮钠的抑制

pH稳定性

6.010.0                        Fig. 3-1

最 适 pH

8.0                             Fig. 3-2

最适温度:

45                            Fig. 3-3

热稳定性:

65以下                        Fig. 3-4

稳 定 剂:

Mg2+

二、      酶活测定方法

1.     原理

 

2. 酶活定义

1个酶活单位等于在以下反应条件下,1分钟生成1微摩尔橙色染料所用的酶量。

3. 检测方法

3.1酶稀释液的配制

150毫摩尔的磷酸钾缓冲液(pH7.50),加2毫摩尔氯化镁,搅拌溶解后,加牛血清白蛋白1克搅拌溶解。

3.2酶活检测试剂配制方法

A(0.1M肌酸溶液):取100ml pH7.5500mM的磷酸钾缓冲液,加入1.49克的肌酸;

B液:浓度为0.5MNaOH溶液;

C液:浓度为1.0%(W/V)的苦味酸溶液。

3.3待测样品的配制

检测前用卧氏称量管称量所需酶。称量时,应至少称量10mg的酶,以保证称量的准确性。用酶稀释液溶解,定容到配制体积。根据理论酶活,用酶稀释液将样品稀释至1.8U/ml2.4 U/ml之间。酶经过稀释液稀释后应该立即测定。

3.4 酶活检测步骤

A1ml37平衡5分钟,加入0.1ml待测样品混合均匀,于37反应10分钟;立刻取0.1ml加入到预先准备好的2ml的氢氧化钠(B液)中;加入1ml苦味酸溶液(C液),于25保温20分钟;空白:以酶稀释液为样品,在520nm测定以上溶液的OD值。

本法的线性范围为:1.8U/ml2.4 U/ml(酶活计算公式见“3.5”)。

3.5 酶活力计算公式

 

酶活力(U/mLA/min×Vt×11×D =A/min×7.33×D

                            ε ×1.0×t×Vs

          

            比活力(U/mg=(U/mL)×1/C

 

 

Vt

:显色总体积    3.1ml

ε

:摩尔吸光系数  4.65  (cm2/micromole)

Vs

11            

:待测酶液的体积    0.1ml

:  反应液体积(1.1ml/试样体积(0.1ml

1.0

t

:比色杯光径    (cm

:  反应时间    (min)

D

:酶液稀释倍数

A/min

C

A/min(待检样品) A/min(空白)    (单位:ABS/min

:酶在稀释液中的浓度    mg/ml

三、       附图

 

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