肌氨酸氧化酶

一、产品介绍

二、酶活测定方法

1.     原理

2. 酶活定义

 酶活定义：1个酶活单位等于在以下反应条件下1分钟生成1微摩尔过氧化氢（1/2微摩尔醌染料）的酶量。

2.     检测方法

3.1  样品稀释液的配制

含有2.0mM EDTA的20mM Tris-HCl buffer, pH 8.0。

3.2  酶活检测试剂配制方法

3.2.1试剂1的配制

分别配置2M Tris-HCl pH8.0 buffer，0.8% 4AA， 6%苯酚以及50KU/L的 POD溶液。在待用配制的容器中加入约27.83 ml去离子水，并放入搅拌子。分别量取2M Tris-HCl 5ml，0.8% 4AA  2ml， 6%苯酚 0.17ml， 50KU/L POD 5ml，小心加入到搅拌容器中，配制完成。(试剂在2-8度放置一个月有效)

3.2.3试剂2的配制

称量适量的肌氨酸溶解到去离子水中，配置成1mol/L的肌氨酸溶液，配制完成。(试剂在2-8度放置一个月有效)

3.2.4待测样品的配制

检测前用卧氏称量管称量所需酶，酶称量时，应至少称量10mg的酶，以保证称量的准确性。用酶稀释液溶解，定容到配制体积。

3.2.5酶活检测步骤

岛津UV2450上的测定方法如下，按比例依次加入以下试剂：1ml的试剂1，0.012ml的酶液，37℃预热60秒后加入0.2ml试剂2，反应2分钟后，在500nm测定反应2分钟内吸光度的变化率。此法酶的线性为100-1000 U /L。 

3.2.6酶活力计算公式

酶活力（U/L）=  △A/min×Vt× D×1000  =△A/min×15188×D

0.5×ε×Vs×d

酶比活力（U/mg）=

三、附图