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肌氨酸氧化酶

肌酐(肌氨酸氧化酶法)试剂盒原料CREAssayKitMaterial
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产品描述
产品参数
英文名称
Sarcosine Oxidase
缩写
SOX
货号
AA0036C
规格
规格可定制

 

一、产品介绍

    观:

黄色无定形粉末

比 活 性:

≥10U/mg

稳 定 性:

-20至少稳定一年

分 子 量:

43KD

等 电 点:

5.32

米氏常数:

2.09×10-3mol/L(肌氨酸)

抑 制 剂:

不受叠氮钠的抑制

pH稳定性:

6.510.5稳定(20,24hr)          (图3-1

最 适 pH

7.0~8.0                          (图3-2

最适温度:

50~55                         (图3-3

热稳定性:

60以下不失活(10min         (图3-4

稳 定 剂:

钾离子有助于酶活的稳定

 

二、酶活测定方法

1.     原理

 

2. 酶活定义

 酶活定义:1个酶活单位等于在以下反应条件下1分钟生成1微摩尔过氧化氢(1/2微摩尔醌染料)的酶量。

2.     检测方法

3.1  样品稀释液的配制

含有2.0mM EDTA20mM Tris-HCl buffer, pH 8.0

3.2  酶活检测试剂配制方法

3.2.1试剂1的配制

分别配置2M Tris-HCl pH8.0 buffer0.8% 4AA6%苯酚以及50KU/L POD溶液。在待用配制的容器中加入约27.83 ml去离子水,并放入搅拌子。分别量取2M Tris-HCl 5ml0.8% 4AA  2ml6%苯酚 0.17ml 50KU/L POD 5ml,小心加入到搅拌容器中,配制完成。(试剂在2-8度放置一个月有效)

3.2.3试剂2的配制

称量适量的肌氨酸溶解到去离子水中,配置成1mol/L的肌氨酸溶液,配制完成。(试剂在2-8度放置一个月有效)

3.2.4待测样品的配制

检测前用卧氏称量管称量所需酶,酶称量时,应至少称量10mg的酶,以保证称量的准确性。用酶稀释液溶解,定容到配制体积。

3.2.5酶活检测步骤

岛津UV2450上的测定方法如下,按比例依次加入以下试剂:1ml的试剂10.012ml的酶液,37预热60秒后加入0.2ml试剂2,反应2分钟后,在500nm测定反应2分钟内吸光度的变化率。此法酶的线性为100-1000 U /L 

3.2.6酶活力计算公式

 

酶活力(U/LA/min×Vt× D×1000  =A/min×15188×D

0.5×ε×Vs×d

Vt

:反应液总体积(1.22ml

ε

:醌的摩尔吸光系数 13.3 cm2/micromole

Vs

:待测酶液的体积(0.02ml

d

:比色杯光径(1cm

D

0.5

:稀释倍数

2分子的H2O2形成1分子的醌

A/min

A/min(待检样品) A/min(空白)(单位:ABS/min

 

 

酶比活力(U/mg=

三、附图

 

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