果糖胺氧化酶

一、产品介绍

二、酶活测定方法

1.     检测原理

1.     酶活定义

1个酶活单位等于在以下反应条件下1分钟内生成1μmol  H₂O₂所需要的酶量。

2.     检测方法

3.1   酶活检测试剂配制方法

3.1.1      试剂A的配制

配制0.1M pH 8.0 磷酸钾缓冲液。

 3.1.1      试剂B的配制

15mM TOOS：0.5g N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺溶于100ml 蒸馏水。

3.1.2      试剂C的配制

POD-4AA溶液：称取1.0KU 过氧化物酶（POD）和100mg 4-氨基安替比林（4-Aminoantipyrine，4AA）溶于1000ml 0.1M 磷酸钾缓冲液 pH=8.0（试剂A）。

3.1.3      试剂D的配制

果糖基缬氨酸溶液：6.4gL-缬氨酸+3g葡萄糖溶于100ml蒸馏水中，121度处理30分钟。（注：产物应为深褐色）。

3.1.4      试剂E（酶稀释液）的配制

酶稀释液：10mM 磷酸钾缓冲液pH=8.0，含0.15% BSA。

3.1  待测样品的配制

检测前用卧氏称量管称量所需酶，酶称量时，应至少称量10毫克的酶，以保证称量的准确性。用酶稀释液(试剂E)溶解，定容到配制体积。测定前使用酶稀释液(试剂E)稀释至100-600U/L。

3.2  酶活检测步骤

1、540μl试剂C、20μl试剂B与20μl稀释好的酶液在37℃保温2分钟。

2、加入0.020ml果糖基缬氨酸，混合均匀。37℃反应5分钟。记录555nm下的吸光值变化。选取反应曲线的线性部分作为测活结果，并计算每分钟吸光值变化（△As/min）。

3、重复第1、2、3步骤，用20μl酶稀释液代替20μl待测酶液。记录空白吸光值（△Ab/min）。

△A/min=△As/min-△Ab/min

3.3  酶活力计算公式

酶比活力（U/mg）=

 三、 附图