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果糖胺氧化酶

糖化血红蛋白(酶法)测定试剂盒原料HbA1cAssayKitMaterial
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产品描述
产品参数
英文名称
Fructosyl Peptide Oxidase
缩写
FAOD-I
货号
AA0090A
规格
规格可定制

一、产品介绍

   观:

黄色无定形粉末

性:

≥3U/mg

性:

-20至少稳定一年

量:

52KD(SDS-PAGE)

剂:

EDTA

剂:

不受叠氮钠影响

pH稳定性

6.08.0                           Fig. 1

pH

7.5                                Fig. 2

最适温度:

3040                          Fig. 3

热稳定性:

40以下稳定                      Fig. 4

二、酶活测定方法

 

1.     检测原理

1.     酶活定义

1个酶活单位等于在以下反应条件下1分钟内生成1μmol  H2O2所需要的酶量。

2.     检测方法

3.1   酶活检测试剂配制方法

3.1.1      试剂A的配制

配制0.1M pH 8.0 磷酸钾缓冲液。

 3.1.1      试剂B的配制

15mM TOOS0.5g N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺溶于100ml 蒸馏水。

3.1.2      试剂C的配制

POD-4AA溶液:称取1.0KU 过氧化物酶(POD)和100mg 4-氨基安替比林(4-Aminoantipyrine4AA)溶于1000ml 0.1M 磷酸钾缓冲液 pH=8.0(试剂A)。

3.1.3      试剂D的配制

果糖基缬氨酸溶液:6.4gL-缬氨酸+3g葡萄糖溶于100ml蒸馏水中,121度处理30分钟。(注:产物应为深褐色)。

3.1.4      试剂E(酶稀释液)的配制

酶稀释液:10mM 磷酸钾缓冲液pH=8.0,含0.15% BSA

3.1  待测样品的配制

检测前用卧氏称量管称量所需酶,酶称量时,应至少称量10毫克的酶,以保证称量的准确性。用酶稀释液(试剂E)溶解,定容到配制体积。测定前使用酶稀释液(试剂E)稀释至100-600U/L

3.2  酶活检测步骤

1540μl试剂C20μl试剂B20μl稀释好的酶液在37保温2分钟。

2、加入0.020ml果糖基缬氨酸,混合均匀。37反应5分钟。记录555nm下的吸光值变化。选取反应曲线的线性部分作为测活结果,并计算每分钟吸光值变化(As/min)。

3、重复第123步骤,用20μl酶稀释液代替20μl待测酶液。记录空白吸光值(Ab/min)。

A/min=As/min-Ab/min

3.3  酶活力计算公式

 

酶比活力(U/mg=

 

A/min

As/min-Ab/min

Vt

:反应液的总体积(0.6 ml

D

:稀释倍数

0.5

1 mol H2O2 产生 0.5 mol 苯醌

ε

:生成的苯醌在555nm的消光系数39.2 (cm2/μmol)

Vs

:酶液体积(0.02ml

d

:比色杯光径(1cm

 三、 附图

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