一、产品介绍
外 观: |
黄色无定形粉末 |
比 活 性: |
≥3U/mg |
稳 定 性: |
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分 子 量: |
52KD(SDS-PAGE) |
稳 定 剂: |
EDTA |
抑 制 剂: |
不受叠氮钠影响 |
pH稳定性: |
6.0~8.0 (Fig. 1) |
最 适 pH: |
7.5 (Fig. 2) |
最适温度: |
30~ |
热稳定性: |
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二、酶活测定方法
1. 检测原理
1. 酶活定义
1个酶活单位等于在以下反应条件下1分钟内生成1μmol H2O2所需要的酶量。
2. 检测方法
3.1 酶活检测试剂配制方法
3.1.1 试剂A的配制
配制0.1M pH 8.0 磷酸钾缓冲液。
3.1.1 试剂B的配制
15mM TOOS:0.5g N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺溶于100ml 蒸馏水。
3.1.2 试剂C的配制
POD-4AA溶液:称取1.0KU 过氧化物酶(POD)和100mg 4-氨基安替比林(4-Aminoantipyrine,4AA)溶于1000ml
3.1.3 试剂D的配制
果糖基缬氨酸溶液:6.4gL-缬氨酸+3g葡萄糖溶于100ml蒸馏水中,121度处理30分钟。(注:产物应为深褐色)。
3.1.4 试剂E(酶稀释液)的配制
酶稀释液:10mM 磷酸钾缓冲液pH=8.0,含0.15% BSA。
3.1 待测样品的配制
检测前用卧氏称量管称量所需酶,酶称量时,应至少称量10毫克的酶,以保证称量的准确性。用酶稀释液(试剂E)溶解,定容到配制体积。测定前使用酶稀释液(试剂E)稀释至100-600U/L。
3.2 酶活检测步骤
1、540μl试剂C、20μl试剂B与20μl稀释好的酶液在
2、加入0.020ml果糖基缬氨酸,混合均匀。
3、重复第1、2、3步骤,用20μl酶稀释液代替20μl待测酶液。记录空白吸光值(△Ab/min)。
△A/min=△As/min-△Ab/min
3.3 酶活力计算公式
酶比活力(U/mg)=
△A/min |
:△As/min-△Ab/min |
Vt |
:反应液的总体积(0.6 ml) |
D |
:稀释倍数 |
0.5 |
:1 mol H2O2 产生 0.5 mol 苯醌 |
ε |
:生成的苯醌在555nm的消光系数39.2 (cm2/μmol) |
Vs |
:酶液体积(0.02ml) |
d |
:比色杯光径( |
三、 附图
IVD原料