一、产品介绍
外观: |
白色微黄无定形粉末 |
比 活 性: |
≥25U/mg |
稳 定 性: |
|
分 子 量: |
大约26KD (SDS-PAGE) |
等 电 点: |
5.3 |
抑 制 剂: |
不受叠氮钠的抑制 |
pH稳定性: |
6.0~10.0 (Fig 3.1) |
最 适 pH: |
10 (Fig 3.2) |
最适温度: |
55℃ (Fig 3.3) |
热稳定性: |
50℃ (Fig 3.4) |
二、酶活测定方法
1. 原理
2. 酶活定义
1个酶活单位等于在25度、pH为8.9条件下每分钟转换1微摩尔雄酮的酶量。
3. 检测方法
3.1 样品稀释液的配制:
3.2 酶活检测试剂配制方法
试剂A:取10水焦磷酸钠
试剂B:
试剂C:雄酮30mg溶于100ml 无水甲醇中溶解。
3.3待测样品的配制
检测前用卧氏称量管称量所需酶,酶称量时,应至少称量10mg的酶,以保证称量的准确性。用酶稀释液溶解,定容到配制体积。根据理论酶活,用样品稀释液将样品储备液稀释至40-200 U/L
3.4 酶活检测步骤
将试剂降温到25度以下(可用水或冰水浴)。 依次取2.6 ml试剂A、0.2 ml试剂B、0.1ml待测酶液混合,在25度保温至平衡(25度),加入0.1ml试剂C并开始计时。在340nm条件下,测定第30-70秒的吸光度的变化率。根据活力计算公式得出酶活。此法测定酶活线性在40-200U/L。
3.5 酶活力计算
Vt |
:反应液总体积 (ml) |
ε |
:NADH摩尔吸光系数 6.22 (cm2/micromole) |
Vs |
:待测酶液的体积 (ml) |
d |
:比色杯光径 (cm) |
D |
:稀释倍数 |
△A/min |
:△A/min(待检样品) -△A/min(空白)(单位:ABS/min) |
三. 附图
IVD原料