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3α-类固醇脱氢酶

总胆汁酸生化试剂盒原料TBAAssayKitMaterial
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产品描述
产品参数
英文名称
3α-Hydroxysteroid Dehydrogenase
缩写
3-HSD
货号
AA0022E
规格
规格可定制

 

一、产品介绍

外观:

白色微黄无定形粉末

比 活 性:

≥25U/mg

稳 定 性:

-20稳定一年

分 子 量:

大约26KD  SDS-PAGE

等 电 点:

5.3

抑 制 剂:

不受叠氮钠的抑制

pH稳定性

6.010.0                   (Fig 3.1)

最 适 pH

10                         (Fig 3.2)

最适温度:

55℃                       (Fig 3.3)

热稳定性:

50                       (Fig 3.4) 

二、酶活测定方法

1. 原理

   

   

2. 酶活定义

1个酶活单位等于在25度、pH8.9条件下每分钟转换1微摩尔雄酮的酶量。

3. 检测方法

3.1 样品稀释液的配制

10mMTris缓冲液,pH9.0,每升加1.0牛血清白蛋白溶解。

3.2 酶活检测试剂配制方法

试剂A:取10水焦磷酸钠44.6800毫升水溶,用盐酸调pH8.90±0.0525度),定容至1L

试剂B9.95NAD加入800毫升水,搅拌下用固体NaHCO3pH7.30±0.05使溶解,定容至1L

试剂C:雄酮30mg溶于100ml 无水甲醇中溶解。

3.3待测样品的配制

检测前用卧氏称量管称量所需酶,酶称量时,应至少称量10mg的酶,以保证称量的准确性。用酶稀释液溶解,定容到配制体积。根据理论酶活,用样品稀释液将样品储备液稀释至40-200 U/L

3.4 酶活检测步骤

    将试剂降温到25度以下(可用水或冰水浴)。 依次取2.6 ml试剂A0.2 ml试剂B0.1ml待测酶液混合,在25度保温至平衡(25度),加入0.1ml试剂C并开始计时。在340nm条件下,测定第30-70秒的吸光度的变化率。根据活力计算公式得出酶活。此法测定酶活线性在40-200U/L

3.5 酶活力计算

 

 

Vt

:反应液总体积 ml

ε

NADH摩尔吸光系数 6.22 cm2/micromole

Vs

:待测酶液的体积 ml

d

:比色杯光径  (cm)

D

:稀释倍数

A/min

A/min(待检样品) A/min(空白)(单位:ABS/min

. 附图

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