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中文名称

N-乙酰神经氨酸醛缩酶

唾液酸生化试剂盒原料SialicAcidAssayKitMaterial
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产品描述
产品参数
英文名称
N-Acetylneuraminic Acid Aldolase
缩写
NAL
货号
AA0087A
规格
规格可定制

 

一、产品介绍

外观:

白色无定形粉末

比 活 性:

≥5U/mg

稳 定 性:

-20至少稳定6个月

分 子 量:

32.6KD

等 电 点:

5.45

米氏常数:

5.7×10-3M(N-Acetylneuraminic acid)

抑 制 剂:

不受叠氮钠的抑制

pH稳定性

5.510.025℃ 24h                    Fig. 1

最 适 pH

6.58.0                               Fig. 2

最适温度:

55                                 Fig. 3

热稳定性:

70以下(含70℃30min不失活          Fig. 4

二、酶活测定方法

1.     检测原理

 

 

2.     酶活定义

一个酶活单位等于在检测条件下每分钟裂解1.0微摩尔N-乙酰神经氨酸的酶量。

3.     检测方法

3.1   酶活检测试剂配制方法

3.1.1        试剂A的配制

50mM 磷酸钾缓冲液 pH 7.5

3.1.2        试剂B的配制

N-乙酰神经氨酸 (50mM)309mg N-乙酰神经氨酸 (MW309)溶于15ml A液中,用1M KOH重新调至pH7.5后,定容至20ml。(05中稳定一周)。

3.1.3        试剂C的配制

LDH(50U/ml):称取适量L-LDH溶于预冷的A液(现用现配)。

3.1.1        试剂D的配制

NADH(1.0mM):称取7.1mg NADH (MW709.4) 溶于A液中,定容至10ml(现用现配)。

3.1.2        试剂E(酶稀释液)的配制

酶稀释液:50mM磷酸钾缓冲液 pH 7.50.2% BSA

3.1  待测样品的配制

检测前称量所需酶,酶称量时,应至少称量10毫克的酶,以保证称量的准确性。用酶稀释液溶解,定容到配制体积,室温放置1小时。测定前使用酶稀释液(E)稀释至100-300U/L

3.2  酶活检测步骤

1按以下体系配制反应液,37保温5分钟。

1.0ml N-乙酰神经氨酸(B)

0.5ml LDH (C)

0.5ml NADH (D)

0.4ml 缓冲液(A)

2. 加入0.1ml酶液,混匀。3. 37反应240s,检测波长为340nm,计算180s-240s间的吸光度变化△OD340/min test)。

3. 重复第12步骤,用0.1ml的酶稀释液代替酶液。计算单位时间吸光值变化(△OD340/min blank

注意:此法酶的最适线性为100-300 U /L

3.3  酶活力计算公式

 酶活力(U/L

酶比活力(U/mg=

 

A/min

OD340/mintest- OD340/minblank

Vt

:反应液的总体积(2.5 ml

D

:稀释倍数

ε

:生成的NADH340nm的消光系数6.22 (cm2/μmol)

Vs

:酶液体积(0.1ml

d

:比色杯光径(1cm

 

 

三、附图

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