一、产品介绍
外观: |
白色无定形粉末 |
比 活 性: |
≥5U/mg |
稳 定 性: |
|
分 子 量: |
32.6KD |
等 电 点: |
5.45 |
米氏常数: |
5.7×10-3M(N-Acetylneuraminic acid) |
抑 制 剂: |
不受叠氮钠的抑制 |
pH稳定性: |
5.5~10.0(25℃ 24h) (Fig. 1) |
最 适 pH: |
6.5~8.0 (Fig. 2) |
最适温度: |
≥55℃ (Fig. 3) |
热稳定性: |
70℃以下(含70℃)30min不失活 (Fig. 4) |
二、酶活测定方法
1. 检测原理
2. 酶活定义
一个酶活单位等于在检测条件下每分钟裂解1.0微摩尔N-乙酰神经氨酸的酶量。
3. 检测方法
3.1 酶活检测试剂配制方法
3.1.1 试剂A的配制
3.1.2 试剂B的配制
N-乙酰神经氨酸 (
3.1.3 试剂C的配制
LDH(50U/ml):称取适量L-LDH溶于预冷的A液(现用现配)。
3.1.1 试剂D的配制
NADH(
3.1.2 试剂E(酶稀释液)的配制
酶稀释液:
3.1 待测样品的配制
检测前称量所需酶,酶称量时,应至少称量10毫克的酶,以保证称量的准确性。用酶稀释液溶解,定容到配制体积,室温放置1小时。测定前使用酶稀释液(E)稀释至100-300U/L。
3.2 酶活检测步骤
1、按以下体系配制反应液,
1.0ml N-乙酰神经氨酸(B)
0.5ml LDH (C)
0.5ml NADH (D)
0.4ml 缓冲液(A)
2. 加入0.1ml酶液,混匀。3.
3. 重复第1、2步骤,用0.1ml的酶稀释液代替酶液。计算单位时间吸光值变化(△OD340/min (blank))
注意:此法酶的最适线性为100-300 U /L。
3.3 酶活力计算公式
酶活力(U/L)=
酶比活力(U/mg)=
△A/min |
:△OD340/min(test)- △OD340/min(blank) |
Vt |
:反应液的总体积(2.5 ml) |
D |
:稀释倍数 |
ε |
:生成的NADH在340nm的消光系数6.22 (cm2/μmol) |
Vs |
:酶液体积(0.1ml) |
d |
:比色杯光径( |
三、附图
IVD原料