N-乙酰神经氨酸醛缩酶

一、产品介绍

二、酶活测定方法

1.     检测原理

2.     酶活定义

一个酶活单位等于在检测条件下每分钟裂解1.0微摩尔N-乙酰神经氨酸的酶量。

3.     检测方法

3.1   酶活检测试剂配制方法

3.1.1        试剂A的配制

50mM 磷酸钾缓冲液 pH 7.5。

3.1.2        试剂B的配制

N-乙酰神经氨酸 (50mM)：309mg N-乙酰神经氨酸 (MW＝309)溶于15ml A液中，用1M KOH重新调至pH7.5后，定容至20ml。（0－5℃中稳定一周）。

3.1.3        试剂C的配制

LDH(50U/ml)：称取适量L-LDH溶于预冷的A液（现用现配）。

3.1.1        试剂D的配制

NADH(1.0mM)：称取7.1mg NADH (MW＝709.4) 溶于A液中，定容至10ml（现用现配）。

3.1.2        试剂E（酶稀释液）的配制

酶稀释液：50mM磷酸钾缓冲液 pH 7.5，0.2% BSA。

3.1  待测样品的配制

检测前称量所需酶，酶称量时，应至少称量10毫克的酶，以保证称量的准确性。用酶稀释液溶解，定容到配制体积，室温放置1小时。测定前使用酶稀释液(E)稀释至100-300U/L。

3.2  酶活检测步骤

1、按以下体系配制反应液，37℃保温5分钟。

1.0ml N-乙酰神经氨酸(B)

0.5ml LDH (C)

0.5ml NADH (D)

0.4ml 缓冲液(A)

2. 加入0.1ml酶液，混匀。3. 37℃反应240s，检测波长为340nm，计算180s-240s间的吸光度变化（△OD₃₄₀/min _（test））。

3. 重复第1、2步骤，用0.1ml的酶稀释液代替酶液。计算单位时间吸光值变化（△OD₃₄₀/min _（blank））

注意：此法酶的最适线性为100-300 U /L。

3.3  酶活力计算公式

 酶活力（U/L）= 

酶比活力（U/mg）=

三、附图