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神经氨酸苷酶(唾液酸酶)

唾液酸生化试剂盒原料SialicAcidAssayKitMaterial
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产品描述
产品参数
英文名称
Neuraminidase
缩写
SA/NA
货号
AA0086A
规格
规格可定制

 

一、产品介绍

外观:

白色无定形粉末

比 活 性:

≥1KU/mg

稳 定 性:

-20至少稳定一年

分 子 量:

42KD

等 电 点:

8.5

米氏常数:

2.1×10-3M(唾液乳糖)

pH稳定性

4.09.5                                Fig. 1

最 适 pH

7.0                                    Fig. 2

最适温度:

55                                   Fig. 3

热稳定性:

42以下稳定                          Fig. 4

二、酶活测定方法

1.     检测原理

  

2.     酶活定义

1个酶活单位等于在以下检测条件下1分钟内水解1微摩尔的唾液酸所需要的酶量。

3.     检测方法

3.1   酶活检测试剂配制方法

A. 50mM PB-KpH 7.5:称取6.8g KH2PO4,加入约800ml去离子水溶解,使用2M KOHpH7.5,定容至1000ml4保存。

B. 8.0mM 唾液乳糖 (N-Acetylneuraminosyl-D-lactose)52.5mg 3'-Sialyllactose (sodium saltMW= 

655.53Carbosynth)溶于10ml 预冷的(0-5)Buffer A。冰浴备用。

C. 100U/ml NAL:用预冷的Buffer A将唾液酸醛缩酶(N-acetylneuraminic acid aldolase) 稀释至100U/ml,冰浴备用。4保存。

D. 100U/ml LDH:用预冷的Buffer AL-LDH(L-乳酸脱氢酶)稀释至100U/ml,冰浴备用。4保存。

E. 2.5mM NADH17.8mg NADH (编号T121MW=709.4) 溶于10ml去离子水,分装后,-20保存;临用前解冻,冰浴备用

F. 酶稀释液:500mg BSA溶于100ml Buffer A中,至终浓度为0.5%W/V),冰浴备用。4保存。

3.1   待测样品的配制

1)向石英比色皿中依次加入125μl A300μl B50μl E62.5μl C62.5μl D充分混匀,37温浴2min

2)然后加入25ul待测酶液,充分混合均匀,37温育反应至10min

3)记录第7-10min340nm下吸光度OD340的变化,并计算每分钟吸光值变化(As/min)。

4)使用酶稀释液代替酶液,重新测定,计算空白吸光度变化(Ab/min

注意:a)本方法的检测线性范围200~500U/L

      b)由于唾液乳糖不稳定,溶解时一定要用预冷的(4)、未污染的A液,并且冰浴放置备用。

3.2.6 酶活力计算公式

       

 

A/min

As/min-Ab/min

Vt

反应总体积(625ul)

D

稀释倍数

ε

NADH340nm处的吸光系数为6.22cm2/mol

Vs

样品体积(25ul)

d

光路长度(1cm)

三、 附图

 

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