一、产品介绍
外观: |
白色无定形粉末 |
比 活 性: |
≥1KU/mg |
稳 定 性: |
|
分 子 量: |
42KD |
等 电 点: |
8.5 |
米氏常数: |
2.1×10-3M(唾液乳糖) |
pH稳定性: |
4.0~9.5 (Fig. 1) |
最 适 pH: |
7.0 (Fig. 2) |
最适温度: |
55℃ (Fig. 3) |
热稳定性: |
42℃以下稳定 (Fig. 4) |
二、酶活测定方法
1. 检测原理
2. 酶活定义
1个酶活单位等于在以下检测条件下1分钟内水解1微摩尔的唾液酸所需要的酶量。
3. 检测方法
3.1 酶活检测试剂配制方法
A. 50mM PB-K,pH 7.5:称取6.8g KH2PO4,加入约800ml去离子水溶解,使用2M KOH调pH至7.5,定容至1000ml,4℃保存。
B. 8.0mM 唾液乳糖 (N-Acetylneuraminosyl-D-lactose):52.5mg 3'-Sialyllactose (sodium salt,MW=
655.53,Carbosynth)溶于10ml 预冷的(0-5℃)Buffer A。冰浴备用。
C. 100U/ml NAL:用预冷的Buffer A将唾液酸醛缩酶(N-acetylneuraminic acid aldolase) 稀释至100U/ml,冰浴备用。4℃保存。
D. 100U/ml LDH:用预冷的Buffer A将L-LDH(L-乳酸脱氢酶)稀释至100U/ml,冰浴备用。4℃保存。
E. 2.5mM NADH:17.8mg NADH (编号T121,MW=709.4) 溶于10ml去离子水,分装后,-20℃保存;临用前解冻,冰浴备用。
F. 酶稀释液:500mg BSA溶于100ml Buffer A中,至终浓度为0.5%(W/V),冰浴备用。4℃保存。
3.1 待测样品的配制
1)向石英比色皿中依次加入125μl A、300μl B、50μl E、62.5μl C、62.5μl D充分混匀,37℃温浴2min
2)然后加入25ul待测酶液,充分混合均匀,37℃温育反应至10min;
3)记录第7-10min内340nm下吸光度OD340的变化,并计算每分钟吸光值变化(△As/min)。
4)使用酶稀释液代替酶液,重新测定,计算空白吸光度变化(△Ab/min)
注意:a)本方法的检测线性范围200~500U/L。
b)由于唾液乳糖不稳定,溶解时一定要用预冷的(4℃)、未污染的A液,并且冰浴放置备用。
△A/min |
△As/min-△Ab/min |
Vt |
反应总体积(625ul) |
D |
稀释倍数 |
ε |
NADH在340nm处的吸光系数为6.22cm2/mol |
Vs |
样品体积(25ul) |
d |
光路长度(1cm) |
三、 附图
IVD原料