一、产品介绍
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外观： |
白色无定形粉末 |
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比 活 性： |
≥1KU/mg |
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稳 定 性： |
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分 子 量： |
42KD |
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等 电 点： |
8.5 |
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米氏常数： |
2.1×10-3M（唾液乳糖） |
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pH稳定性： |
4.0～9.5 （Fig. 1） |
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最 适 pH： |
7.0 （Fig. 2） |
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最适温度： |
55℃ （Fig. 3） |
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热稳定性： |
42℃以下稳定 （Fig. 4） |
二、酶活测定方法
1. 检测原理
2. 酶活定义
1个酶活单位等于在以下检测条件下1分钟内水解1微摩尔的唾液酸所需要的酶量。
3. 检测方法
3.1 酶活检测试剂配制方法
A. 50mM PB-K，pH 7.5：称取6.8g KH2PO4，加入约800ml去离子水溶解，使用2M KOH调pH至7.5，定容至1000ml，4℃保存。
B. 8.0mM 唾液乳糖 (N-Acetylneuraminosyl-D-lactose)：52.5mg 3'-Sialyllactose (sodium salt，MW=
655.53，Carbosynth)溶于10ml 预冷的(0-5℃)Buffer A。冰浴备用。
C. 100U/ml NAL：用预冷的Buffer A将唾液酸醛缩酶(N-acetylneuraminic acid aldolase) 稀释至100U/ml，冰浴备用。4℃保存。
D. 100U/ml LDH：用预冷的Buffer A将L-LDH(L-乳酸脱氢酶)稀释至100U/ml，冰浴备用。4℃保存。
E. 2.5mM NADH：17.8mg NADH (编号T121，MW=709.4) 溶于10ml去离子水，分装后，-20℃保存；临用前解冻，冰浴备用。
F. 酶稀释液：500mg BSA溶于100ml Buffer A中，至终浓度为0.5%（W/V），冰浴备用。4℃保存。
3.1 待测样品的配制
1）向石英比色皿中依次加入125μl A、300μl B、50μl E、62.5μl C、62.5μl D充分混匀，37℃温浴2min
2）然后加入25ul待测酶液，充分混合均匀，37℃温育反应至10min；
3）记录第7-10min内340nm下吸光度OD340的变化，并计算每分钟吸光值变化（△As/min）。
4）使用酶稀释液代替酶液，重新测定，计算空白吸光度变化（△Ab/min）
注意：a）本方法的检测线性范围200~500U/L。
b）由于唾液乳糖不稳定，溶解时一定要用预冷的（4℃）、未污染的A液，并且冰浴放置备用。
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△A/min |
△As/min-△Ab/min |
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Vt |
反应总体积(625ul) |
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D |
稀释倍数 |
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ε |
NADH在340nm处的吸光系数为6.22cm2/mol |
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Vs |
样品体积(25ul) |
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d |
光路长度(1cm) |
三、 附图
IVD原料