一、产品介绍
外观: |
微黄无定形粉末 |
比 活 性: |
≥10U/mg |
稳 定 性: |
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分 子 量: |
大约75KD |
等 电 点: |
6.0 |
抑 制 剂: |
不受叠氮钠的抑制 |
pH稳定性: |
6.0~8.5(37℃,2hr.) (Fig.3-1) |
最 适 pH: |
7.0~9.0 (Fig.3-2) |
最适温度: |
35℃~50℃ (Fig.3-3) |
热稳定性: |
45℃以下稳定(15min.) (Fig.3-4) |
二、酶活测定方法
1. 原理
2. 酶活定义
1个酶活单位等于在以下要求的反应条件下1分钟生成1微摩尔H2O2(对应1/2微摩尔醌染料)所需要的酶量。
3. 检测方法
3.1 稀释液的配制
在800毫升去离子水中,加入
3.2 酶活检测试剂配制方法
试剂A:24.23克Tris加入800毫升水,搅拌溶解,在25度下,用盐酸调节pH到8.00;
试剂B:15毫摩尔4-AA 溶液(0.305克4-AA溶于100毫升水中混匀。)
试剂C:0.2%(W/V)苯酚溶液(2克苯酚溶于1升水中溶解);
试剂D:浓度为50 U/ml的POD溶液(5ku酶用100毫升试剂A溶解);
试剂E:1%(W/V)Triton X-100溶液(10克 Triton X-100加入1升水中溶解);
试剂F:用2毫升的稀释液溶解10 mg 棕榈酸辅酶A;
试剂G(乙酰辅酶A氧化酶稀释液):使用前在3.1配制的稀释液加入FAD单钠盐至8毫克/升、
加ATP至1.52克/升,此为乙酰辅酶A氧化酶稀释液。
3.2.3待测样品的配制
检测前用卧氏称量管称量所需酶,酶称量时,应至少称量10mg的酶,以保证称量的准确性。用酶稀释液溶解,定容到配制体积。
3.3 酶活检测步骤
比色杯中按比例依次加入以下试剂:0.2毫升的试剂A、0.1毫升的试剂B、0.1毫升试剂C、0.1毫升试剂D、0.1毫升试剂E、0.1毫升试剂F、0.3毫升去离子水。37℃预热300秒后加待测酶液0.02毫升,在500nm波长条件下测定1分钟内吸光度的变化率。此法酶的线性为0.2-0.5ku/L。
3.4 酶活力计算公式
酶活力(U/L)= △A/min×Vt× D×1000 =△A/min×8500×D
0.5×ε×Vs×d
Vt |
:反应液总体积 (ml) |
ε |
:摩尔吸光系数 12 (cm2/micromole) |
Vs |
:待测酶液的体积 (ml) |
d |
:比色杯光径 ( |
D |
:稀释倍数 |
△A/min |
:△A/min(待检样品) -△A/min(空白)(单位:ABS/min) |
三. 附图
IVD原料