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乙酰辅酶A氧化酶

游离脂肪酸生化试剂盒原料NEFAAssayKitMaterial
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产品描述
产品参数
英文名称
Acetyl-CoA Oxidase
缩写
ACOD
货号
AA0078A
规格
规格可定制

一、产品介绍

外观:

微黄无定形粉末

比 活 性:

≥10U/mg

稳 定 性:

-20至少稳定一年

分 子 量:

大约75KD

等 电 点:

6.0

抑 制 剂:

不受叠氮钠的抑制

pH稳定性

6.08.537℃,2hr.                                 Fig.3-1

最 适 pH

7.09.0                                            Fig.3-2

最适温度:

3550                                         Fig.3-3

热稳定性:

45以下稳定(15min.)                               Fig.3-4

二、酶活测定方法

1.     原理

2.  酶活定义

1个酶活单位等于在以下要求的反应条件下1分钟生成1微摩尔H2O2(对应1/2微摩尔醌染料)所需要的酶量。

3.  检测方法

3.1  稀释液的配制

800毫升去离子水中,加入2.3磷酸二氢钾、22.8磷酸氢二钾,搅拌溶解,用氢氧化钾调节pH7.60,定容至1

3.2  酶活检测试剂配制方法

3.2.1 试剂的配制

试剂A24.23Tris加入800毫升水,搅拌溶解,在25度下,用盐酸调节pH8.00

试剂B15毫摩尔4-AA 溶液(0.3054-AA溶于100毫升水中混匀。)

试剂C0.2%W/V)苯酚溶液(2克苯酚溶于1升水中溶解);

试剂D:浓度为50 U/mlPOD溶液(5ku酶用100毫升试剂A溶解);

试剂E1%W/VTriton X-100溶液(10 Triton X-100加入1升水中溶解);

试剂F:用2毫升的稀释液溶解10 mg 棕榈酸辅酶A

试剂G(乙酰辅酶A氧化酶稀释液):使用前在3.1配制的稀释液加入FAD单钠盐至8毫克/升、

       ATP1.52/升,此为乙酰辅酶A氧化酶稀释液。

3.2.3待测样品的配制

检测前用卧氏称量管称量所需酶,酶称量时,应至少称量10mg的酶,以保证称量的准确性。用酶稀释液溶解,定容到配制体积。

3.3 酶活检测步骤

    比色杯中按比例依次加入以下试剂:0.2毫升的试剂A0.1毫升的试剂B0.1毫升试剂C0.1毫升试剂D0.1毫升试剂E0.1毫升试剂F0.3毫升去离子水。37预热300秒后加待测酶液0.02毫升,在500nm波长条件下测定1分钟内吸光度的变化率。此法酶的线性为0.2-0.5ku/L

3.4 酶活力计算公式

酶活力(U/LA/min×Vt× D×1000  =A/min×8500×D

0.5×ε×Vs×d

Vt

:反应液总体积 ml

ε

:摩尔吸光系数 12 cm2/micromole

Vs

:待测酶液的体积  (ml)

d

:比色杯光径  (1cm)

D

:稀释倍数

A/min

A/min(待检样品) A/min(空白)(单位:ABS/min

 

 

. 附图  

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