一、产品介绍
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外观： |
微黄无定形粉末 |
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比 活 性： |
≥10U/mg |
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稳 定 性： |
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分 子 量： |
大约75KD |
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等 电 点： |
6.0 |
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抑 制 剂： |
不受叠氮钠的抑制 |
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pH稳定性： |
6.0～8.5（37℃，2hr.） （Fig.3-1） |
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最 适 pH： |
7.0～9.0 （Fig.3-2） |
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最适温度： |
35℃～50℃ （Fig.3-3） |
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热稳定性： |
45℃以下稳定(15min.) （Fig.3-4） |
二、酶活测定方法
1. 原理
2. 酶活定义
1个酶活单位等于在以下要求的反应条件下1分钟生成1微摩尔H2O2（对应1/2微摩尔醌染料）所需要的酶量。
3. 检测方法
3.1 稀释液的配制
在800毫升去离子水中，加入
3.2 酶活检测试剂配制方法
试剂A：24.23克Tris加入800毫升水，搅拌溶解，在25度下，用盐酸调节pH到8.00；
试剂B：15毫摩尔4-AA 溶液（0.305克4-AA溶于100毫升水中混匀。）
试剂C：0.2%（W/V）苯酚溶液（2克苯酚溶于1升水中溶解）；
试剂D：浓度为50 U/ml的POD溶液（5ku酶用100毫升试剂A溶解）；
试剂E：1%（W/V）Triton X-100溶液（10克 Triton X-100加入1升水中溶解）；
试剂F：用2毫升的稀释液溶解10 mg 棕榈酸辅酶A；
试剂G（乙酰辅酶A氧化酶稀释液）：使用前在3.1配制的稀释液加入FAD单钠盐至8毫克/升、
加ATP至1.52克/升，此为乙酰辅酶A氧化酶稀释液。
3.2.3待测样品的配制
检测前用卧氏称量管称量所需酶，酶称量时，应至少称量10mg的酶，以保证称量的准确性。用酶稀释液溶解，定容到配制体积。
3.3 酶活检测步骤
比色杯中按比例依次加入以下试剂：0.2毫升的试剂A、0.1毫升的试剂B、0.1毫升试剂C、0.1毫升试剂D、0.1毫升试剂E、0.1毫升试剂F、0.3毫升去离子水。37℃预热300秒后加待测酶液0.02毫升，在500nm波长条件下测定1分钟内吸光度的变化率。此法酶的线性为0.2-0.5ku/L。
3.4 酶活力计算公式
酶活力（U/L）= △A/min×Vt× D×1000 =△A/min×8500×D
0.5×ε×Vs×d
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Vt |
：反应液总体积 （ml） |
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ε |
：摩尔吸光系数 12 （cm2/micromole） |
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Vs |
：待测酶液的体积 (ml) |
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d |
：比色杯光径 ( |
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D |
：稀释倍数 |
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△A/min |
：△A/min（待检样品） －△A/min（空白）（单位：ABS/min） |
三. 附图
IVD原料