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乙酰辅酶A合成酶

游离脂肪酸生化试剂盒原料NEFAAssayKitMaterial
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产品描述
产品参数
英文名称
Acetyl-CoA Synthase
缩写
ACS
货号
AA0077A
规格
规格可定制

 

一、产品介绍

外观:

白色无定形粉末

比 活 性:

≥1.5U/mg

稳 定 性:

-20至少稳定一年

分 子 量:

64KD

等 电 点:

5.2

米氏常数:

Palmitic acid1.1×10-5MATP1.7×10-4M

CoA3.2×10-4M

抑 制 剂:

不受叠氮钠的抑制

pH稳定性

6.57.5                                Fig. 1

最 适 pH

8.0                                    Fig. 2

最适温度:

37                                   Fig. 3

热稳定性:

50以下稳定(2mM  ATP              Fig. 4

二、酶活测定方法

1.     检测原理

  

2.     酶活定义

1个酶活单位等于在以下检测条件下1分钟内转化1微摩尔棕榈酸所需要的酶量。

3.     检测方法

3.1   酶活检测试剂配制方法

3.1.1 试剂A的配制

配制0.05MpH 7.5的磷酸钾缓冲液。

3.1.2 试剂B的配制

0.8试剂A中依次加入ATP·Na20.6053,六水氯化镁0.20330.8216辅酶A,调整pH7.5,用试剂A定容到1。(可按比例配制,辅酶A不稳定,可现用现加)。

3.1.3 试剂C的配制

0.8水中加入50Triton X-1002毫摩尔的棕榈酸,加热使棕榈酸完全溶解,冷却到室温,用氢氧化钠调节pH7.5,用试剂A定容到1。(可按比例配制)

3.1.4 试剂D的配制

0.8试剂A中依次加入0.1251NEM(马来酰亚胺),0.5054-氨基安替吡啉,8kU过氧化物酶,0.25叠氮钠,调整pH7.5,用试剂A定容到1。(可按比例配制)

3.1.5 试剂E的配制

80ml试剂A中加入2克苯酚,用试剂A定容到100ml。(可按比例配制)

3.1.6试剂F的配制

ACS稀释液:在1pH7.510毫摩尔磷酸钾缓冲液中加入2毫摩尔的ATP1Triton X-100。(可按比例配制)

3.1.7 试剂G的配制

ACOD稀释液:在1pH7.525毫摩尔磷酸钾缓冲液中加入0.02毫摩尔FAD0.2牛血清蛋白。(可按比例配制)

3.1.8 试剂H的配制

用试剂G配制240kU/LACOD(乙酰辅酶A氧化酶)酶液。

3.2  待测样品的配制

检测前用卧氏称量管称量所需酶,酶称量时,应至少称量10毫克的酶,以保证称量的准确性。用酶稀释液(试剂F)溶解,定容到配制体积。   

3.2.5 酶活检测步骤

1320μl试剂B80μl试剂C37保温1分钟。

2、加入20μl稀释好的ACS酶液,37反应10分钟。

3、加入800μl试剂D20μl试剂E37保温2分钟;加入20μl试剂H37℃反应5分钟,记录吸光值(As)。

4、重复第123步骤,用20微升的ACS稀释液代替ACS酶液。记录空白吸光值(Ab)。

注意:A=As-Ab≤0.300;此法酶的最适线性为100-200 U /L

3.2.6 酶活力计算公式

酶活力(U/LA/min×Vt× D×1000  =A/min×1050×D

                                    0.5×ε×Vs×d

 

ε

:生成的醌亚胺在500nm的消光系数(12

Vt

1/2

:反应液的总体积(1.26ml

1M H2O2产生0.5M的醌染料

d

:比色杯光径(1cm

D

A

:稀释倍数

As-Ab

                                酶比活力(U/mg

 

 

. 附图

 

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