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谷氨酸脱氢酶≥ 100U/mg

尿素(氮)、血氨、钾生化试剂盒原料Urea/bloodammonia/PotassiumAssayKitMaterial
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产品描述
产品参数
英文名称
Glutamate Dehydrogenase (NAD Dependent) ≥ 100U/mg
缩写
GLDH
货号
AA0016A
规格
规格可定制

 

一、产品介绍

外观:

白色微黄的无定形粉末

比 活 性:

≥150U/mg

稳 定 性:

-20℃至少稳定一年

分 子 量:

大约50KD

等 电 点:

5.92

米氏常数:

10.4×10-3 mol/L(以NN4Cl为底物);7.42×10-3 mol/L(以α-酮戊二酸为底物);

6.65×10-4 mol/L(以NADH为底物)

抑 制 剂:

不受叠氮钠的抑制

pH稳定性:

5.010.0        Fig.3-1

最 适 pH

7.08.0         Fig.3-2

最适温度:

45℃左右        Fig.3-3

热稳定性:

50℃以下        Fig.3-4

二、酶活测定方法

1. 原理  

 

 2.  酶活定义

1个酶活单位等于在以下反应条件下1分钟消耗1微摩尔NADH的酶量,为1单位。

3. 检测方法

3.1  样品稀释液的配制

800毫升去离子水中,加入30Tris搅拌溶解,用盐酸调节pH7.80,加0.74EDTA·2Na1牛血清白蛋白、1叠氮钠、4.0TritonX-100,搅拌溶解,用盐酸调节pH7.8025),定容到12-8度保存。

3.2  酶活检测试剂配制方法

3.2.1试剂1的配制

800毫升去离子水中加入6.06Tris搅拌溶解,用盐酸调节pH8.45,加5.349氯化铵、1.00 克叠氮钠,用盐酸调节pH8.30±0.0525),加0.70α-酮戊二酸,搅拌溶解,定容至1,再次确认pH并用盐酸微调节到8.30±0.052-8度保存。

3.2.2试剂2的配制

800毫升去离子水中,加入21.1CAPS搅拌,用氢氧化钾调节pH9.6±0.1,加1.0牛血清白蛋白、2.0叠氮钠搅拌溶解,溶液冷却到2-8℃,加1.4NADH搅拌溶解,加水到1,用氢氧化钾或盐酸调pH9.6±0.12-8度保存。

3.2.3待测样品的配制

检测前用卧氏称量管称量所需酶,酶称量时,应至少称量10mg的酶,以保证称量的准确性。用样品稀释液溶解,定容到配制体积。此稀释液需在稀释后120分钟内测定完成。

3.2.5 酶活检测步骤

按比例依次加入以下试剂:0.9ml的试剂10.18ml的试剂237预热60秒,4分钟后加待测酶液

0.015ml,在340nm测定1分钟内吸光度的变化率。此法酶的线性为(100-1000U/L,建议检测时用(100-500U/L之间的标本进行检测。

3.2.6 酶活力计算公式

酶活力(U/LA/min×Vt× D×1000  =A/min×11736×D

ε×Vs×d

Vt

:反应液总体积     1.095ml

ε

:摩尔吸光系数      6.22cm2/micromole

Vs

:待测酶液的体积   0.015ml

d

:比色杯光径       1cm

D

:稀释倍数

A/min

A/min(待检样品) A/min(空白)(单位:ABS/min

 . 附图

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