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甘油激酶

甘油三脂生化试剂盒原料TGAssayKitMaterial
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产品描述
产品参数
英文名称
Glycerol Kinase
缩写
GK
货号
AA0018B
规格
规格可定制

 

一、产品介绍

外观:

淡黄色无定形粉末

比 活 性:

≥30U/mg

稳 定 性:

-20至少稳定一年

分 子 量:

55KD

等 电 点:

4.3

米氏常数:

ATP  1.3×10-5M  

甘油  5.2×10-5M

抑 制 剂:

不受叠氮钠的抑制

pH稳定性

6.010.0                       Fig.3-1

最 适 pH

8.0                             Fig.3-2

最适温度:

50                           Fig.3-3

热稳定性:

60                           Fig.3-4

二、酶活测定方法

1.     原理

 

 

2. 酶活定义

1个酶活单位等于在以下反应条件下1分钟生成1微摩尔过氧化氢(1/2毫摩尔醌染料)的酶量

3. 检测方法

3.1  样品稀释液的配制

800毫升去离子水中,加入13.6磷酸二氢钾、2牛血清白蛋白、1叠氮钠,搅拌溶解,用氢氧化钠在25度下调节pH=7.9,定容至1

3.2  酶活检测试剂配制方法

3.2.试剂1的配制

800毫升去离子水中,加入11.34HEPES,搅拌溶解,用氢氧化钠在25度下调节pH=7.9,加入0.526甘油、0.228苯酚、0.468氯化镁、1叠氮钠、6.24KU过氧化物酶搅拌溶解,用氢氧化钠调pH值到7.9025),严格控制温度和pH。定容至1

3.2.2试剂2的配制

500毫升去离子水中,加入11.34HEPES,搅拌溶解,用氢氧化钠在25度下调节pH=7.9,加入13.83ATP·Na20.5724-氨基安替吡啉(4-AA)、2.5牛血清白蛋白、2.5叠氮钠、45.6KU甘油磷酸氧化酶搅拌溶解,用氢氧化钠调pH值到7.9025),严格控制温度和pH。定容至1

3.2.4待测样品的配制

检测前用卧氏称量管称量所需酶,酶称量时,应至少称量10mg的酶,以保证称量的准确性。用酶稀释液溶解,定容到配制体积。

3.2.5酶活检测步骤

按比例依次加入以下试剂:1ml的试剂10.2ml试剂237预热180秒后加入0.012ml的酶液,混合均匀,反应2分钟后,在505nm测定反应1分钟内吸光度的变化率。此法酶的线性为100-400 U /L

3.2.6酶活力计算公式 

 

 

Vt

 

:反应液总体积(ml

ε

:摩尔吸光系数 13.3cm2/micromole

Vs

:待测酶液的体积(ml

d

:比色杯光径(cm

D

0.5

:稀释倍数

1摩尔 H2O2产生0.5摩尔的醌染料

A/min

A/min(待检样品) A/min(空白)(单位:ABS/min

 . 附图

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