甘油激酶

甘油三脂生化试剂盒原料TGAssayKitMaterial

所属分类

酶及辅酶

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产品描述

产品参数

英文名称

Glycerol Kinase

缩写

货号

AA0018B

规格

规格可定制

一、产品介绍

外观：	淡黄色无定形粉末
比活性：	≥30U/mg
稳定性：	-20℃至少稳定一年
分子量：	55KD
等电点：	4.3
米氏常数：	ATP 1.3×10^-5M 甘油 5.2×10^-5M
抑制剂：	不受叠氮钠的抑制
pH稳定性：	6.0～10.0 （Fig.3-1）
最适 pH：	8.0 （Fig.3-2）
最适温度：	50℃ （Fig.3-3）
热稳定性：	60℃ （Fig.3-4）

二、酶活测定方法

1. 原理

2. 酶活定义

1个酶活单位等于在以下反应条件下1分钟生成1微摩尔过氧化氢（1/2毫摩尔醌染料）的酶量

3. 检测方法

3.1 样品稀释液的配制

在800毫升去离子水中，加入13.6克磷酸二氢钾、2克牛血清白蛋白、1克叠氮钠，搅拌溶解，用氢氧化钠在25度下调节pH=7.9，定容至1升。

3.2 酶活检测试剂配制方法

3.2.试剂1的配制

在800毫升去离子水中，加入11.34克HEPES，搅拌溶解，用氢氧化钠在25度下调节pH=7.9，加入0.526克甘油、0.228克苯酚、0.468克氯化镁、1克叠氮钠、6.24KU过氧化物酶搅拌溶解，用氢氧化钠调pH值到7.90（25℃），严格控制温度和pH。定容至1升。

3.2.2试剂2的配制

在500毫升去离子水中，加入11.34克HEPES，搅拌溶解，用氢氧化钠在25度下调节pH=7.9，加入13.83克ATP·Na₂、0.572克4-氨基安替吡啉（4-AA）、2.5克牛血清白蛋白、2.5克叠氮钠、45.6KU甘油磷酸氧化酶搅拌溶解，用氢氧化钠调pH值到7.90（25℃），严格控制温度和pH。定容至1升。

3.2.4待测样品的配制

检测前用卧氏称量管称量所需酶，酶称量时，应至少称量10mg的酶，以保证称量的准确性。用酶稀释液溶解，定容到配制体积。

3.2.5酶活检测步骤

按比例依次加入以下试剂：1ml的试剂1，0.2ml试剂2，37℃预热180秒后加入0.012ml的酶液，混合均匀，反应2分钟后，在505nm测定反应1分钟内吸光度的变化率。此法酶的线性为100-400 U /L。

3.2.6酶活力计算公式

Vt	：反应液总体积（ml）
ε	：摩尔吸光系数 13.3（cm²/micromole）
Vs	：待测酶液的体积（ml）
d	：比色杯光径（cm）
D 0.5	：稀释倍数：1摩尔 H₂O₂产生0.5摩尔的醌染料
△A/min	：△A/min_{（待检样品）} －△A/min_（空白）（单位：ABS/min）

三. 附图

关键词

谷氨酸脱氢酶≥ 100U/mg

胆固醇氧化酶

IVD原料