胆固醇氧化酶

一、产品介绍

二、酶活测定方法

1.     原理

2. 酶活定义

1个酶活单位等于在以下反应条件下1分钟生成1微摩尔过氧化氢（1/2微摩尔醌染料）所用的酶量。

3. 检测方法

3.1  样品稀释液的配制

在800毫升去离子水中，加入2.72克磷酸二氢钾、2克牛血清白蛋白、1克叠氮钠，搅拌溶解，用4M氢氧化钠调节pH=7.0(25℃)，定容至1升。

3.2  酶活检测试剂配制方法

3.2.1胆固醇母液（5g/L）的配制

    在100毫升去离子水中加入400毫升正丙醇、5克胆固醇，100毫升Triton X-100 ，加热后溶解，加1克叠氮钠搅拌溶解，定容至1升。

3.2.2试剂1的配制

在800毫升去离子水中，加入1.36克磷酸二氢钾，搅拌溶解，用氢氧化钠调节pH=7.0(25℃)，加入0.942苯酚、1克叠氮钠搅拌溶解，用氢氧化钠调pH值到7.00（25℃），定容至1升。

3.2.3试剂2的配制

在800毫升去离子水中，加入1.36克磷酸二氢钾，搅拌溶解，用氢氧化钠调节pH=7.0(25℃)，加入3.6克胆酸钠、2克牛血清白蛋白并搅拌溶解，加0.4克4－氨基安替吡啉、1克叠氮钠，36毫升胆固醇母液搅拌溶解，加过氧化物酶3.0KU，搅拌溶解。用氢氧化钠调pH值到7.00（25℃），定容至1升。

使用前观察试剂2的外观。如果试剂2放置时间长出现混浊，沉淀为胆固醇，试剂需要重新配制。

3.2.4待测样品的配制

检测前用卧氏称量管称量所需酶，酶称量时，应至少称量10mg的酶，以保证称量的准确性。用酶稀释液溶解，定容到配制体积。

3.3 酶活检测步骤

按比例依次加入以下试剂：0.6ml的试剂1，0.6ml的试剂2，37℃预热60秒，4分钟后加待测酶液0.012ml，在505nm测定1分钟内吸光度的变化率。此法酶的线性为75-1000U/L，建议检测时用200-400U/L之间的标本进行检测。

3.4 酶活力计算公式

酶活力（U/L）=  △A/min×Vt× D×1000  =△A/min×15188×D

0.5×ε×Vs×d

 三. 附图