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胆固醇氧化酶

总胆固醇,高密度脂蛋白胆固醇,低密度脂蛋白胆固醇生化试剂盒原料TCHO/HDL/LDLAssayKitMaterial
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产品描述
产品参数
英文名称
Cholesterol Oxidase
缩写
COD
货号
AA0008D
规格
规格可定制

 

一、产品介绍

外观:

淡黄色无定形粉末

比 活 性:

≥10U/mg

稳 定 性:

-20至少稳定一年

分 子 量:

大约62KD

等 电 点:

5.46

米氏常数:

1 x 104 M(胆固醇)

抑 制 剂:

不受叠氮钠的抑制

pH稳定性

6.010.0         Fig.3-1

最 适 pH

6.57.5          Fig.3-2

最适温度:

52             Fig.3-3

热稳定性:

60以下稳定     Fig.3-4

稳 定 剂:

钾离子有助于稳定酶活

二、酶活测定方法

1.     原理

  

2. 酶活定义

1个酶活单位等于在以下反应条件下1分钟生成1微摩尔过氧化氢(1/2微摩尔醌染料)所用的酶量。

3. 检测方法

3.1  样品稀释液的配制

800毫升去离子水中,加入2.72磷酸二氢钾、2牛血清白蛋白、1叠氮钠,搅拌溶解,用4M氢氧化钠调节pH=7.0(25),定容至1

3.2  酶活检测试剂配制方法

3.2.1胆固醇母液(5g/L)的配制

    100毫升去离子水中加入400毫升正丙醇、5胆固醇,100毫升Triton X-100 ,加热后溶解,加1叠氮钠搅拌溶解,定容至1

3.2.2试剂1的配制

800毫升去离子水中,加入1.36磷酸二氢钾,搅拌溶解,用氢氧化钠调节pH=7.0(25),加入0.942苯酚、1叠氮钠搅拌溶解,用氢氧化钠调pH值到7.0025,定容至1

3.2.3试剂2的配制

800毫升去离子水中,加入1.36磷酸二氢钾,搅拌溶解,用氢氧化钠调节pH=7.0(25),加入3.6胆酸钠、2牛血清白蛋白并搅拌溶解,加0.44-氨基安替吡啉、1叠氮钠,36毫升胆固醇母液搅拌溶解,加过氧化物酶3.0KU,搅拌溶解。用氢氧化钠调pH值到7.0025),定容至1

使用前观察试剂2的外观。如果试剂2放置时间长出现混浊,沉淀为胆固醇,试剂需要重新配制。

3.2.4待测样品的配制

检测前用卧氏称量管称量所需酶,酶称量时,应至少称量10mg的酶,以保证称量的准确性。用酶稀释液溶解,定容到配制体积。

3.3 酶活检测步骤

按比例依次加入以下试剂:0.6ml的试剂10.6ml的试剂237预热60秒,4分钟后加待测酶液0.012ml,在505nm测定1分钟内吸光度的变化率。此法酶的线性为75-1000U/L,建议检测时用200-400U/L之间的标本进行检测。

3.4 酶活力计算公式

 

酶活力(U/LA/min×Vt× D×1000  =A/min×15188×D

0.5×ε×Vs×d

Vt

:反应液总体积 ml

ε

:摩尔吸光系数 13.3cm2/micromole

Vs

:待测酶液的体积 ml

d

:比色杯光径 cm

D

:稀释倍数

A/min

A/min(待检样品) A/min(空白)(单位:ABS/min

 

 . 附图

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