胆固醇酯酶

一、产品介绍

二、酶活测定方法

1.     原理

2. 酶活定义

    1个酶活单位等于在以下反应条件下1分钟生成1微摩尔过氧化氢（1/2毫摩尔醌染料）的酶量。

3. 检测方法

3.1  样品稀释液的配制

在800ml去离子水中，加入2.72g的磷酸二氢钾，NaOH粗调pH=7.5，加入0.19g的氯化镁，0.186g的EDTA·2Na，2g的牛血清白蛋白，1g的叠氮钠。用KOH严格调节pH=7.0（25℃），然后将溶液体积定容至1000ml。

3.2  酶活检测试剂配制方法

3.2.1试剂1的配制

在800ml去离子水中，加入14g的磷酸二氢钾，用KOH溶液粗调至pH=7.0，加入0.961g的4氨基安替吡啉，15KU的过氧化物酶，30KU的胆固醇氧化酶，1g的叠氮钠。用KOH严格调节pH=7.0（25℃），然后将溶液定容至1000ml。

3.2.2试剂2a的配制

在800ml去离子水中，加入14g的磷酸二氢钾，搅拌溶解，用KOH溶液粗调pH=7.0，加入6g的苯酚、2g的叠氮钠搅拌溶解，用KOH溶液调pH值到7.0（25℃），然后将溶液定容至1升。

3.2.3试剂2b的配制

在80ml去离子水中，加入1g的Triton X-100，水浴加热到70℃。量39mg的胆固醇亚油酸酯至10ml小烧杯，加入2ml异丙醇溶解后，缓缓加入到水浴的溶液中，用水浴的Triton X-100溶液洗小烧杯2-3次。70℃水浴下搅拌溶液，3-5分钟后溶液变清，停止水浴加热，温度降到60℃后加入0.6g的胆酸钠，完全溶解后降到室温后定容至100ml。

3.2.4待测样品的配制

检测前用卧氏称量管称量所需酶，酶称量时，应至少称量10mg的酶，以保证称量的准确性。用酶稀释液溶解，定容到配制体积。

3.2.5 酶活检测步骤

按比例依次加入以下试剂：0.3ml的试剂1，0.45ml试剂2a，0.45ml试剂2b，37℃预热180秒后加入0.04ml的酶液，混合均匀，反应2分钟后，在505nm测定反应1分钟内吸光度的变化率。此法酶的线性为100-300 U /L。

3.2.6 酶活力计算公式

酶活力（U/L）=  △A/min×Vt × D×1000  =△A/min×4499×D

0.5×ε×Vs×d

 三. 附图