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乳酸脱氢酶

丙氨酸氨基转移酶,天门冬氨酸氨基转移酶生化试剂盒原料ALT/ASTAssayKitMaterial
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产品描述
产品参数
英文名称
Lactate Dehydrogenase
缩写
LDH
货号
AA0024C
规格
规格可定制

 

一、产品介绍

外观:

白色无定形粉末

比 活 性:

≥150U/mg

稳 定 性:

-20至少稳定一年

分 子 量:

42KD

等 电 点:

4.98

米氏常数:

4.0×10-4mol/L(Pyruvate)

抑 制 剂:

不受叠氮钠的抑制

pH稳定性:

4.510.0稳定(25,24hr)          (图3-1

最 适 pH

6.5~8.0                          (图3-2

最适温度:

40~50                         (图3-3

热稳定性:

55以下不失活(15min         (图3-4

稳 定 剂:

添加0.1%BSA有助于稳定酶活

 

二、酶活测定方法

1.     原理

  

2. 酶活定义

酶活定义:1个酶活单位等于在以下反应条件下1分钟生成1微摩尔NAD+的酶量。

3. 检测方法

3.1  样品稀释液的配制

800毫升去离子水中,加入1BSA1.36磷酸二氢钾,用氢氧化钠调整pH7. 025),定容至1。(稀释液2-8℃条件下稳定期为2个月)

3.2  酶活检测试剂配制方法

3.2.1试剂1的配制

800毫升去离子水中,加入12.1Tris,用盐酸调整pH7.7025),加入1叠氮钠搅拌溶解,定容至1

使用前取适量体积加入丙酮酸钠至0.4g/L,配制完成。(试剂在2-8℃保存,有效期为一周)

3.2.3试剂2的配制

800毫升去离子水中,加入21.1CAPS3-环己胺基丙磺酸),用氢氧化钠调整pH9.70,加入1.20NADH1叠氮钠搅拌溶解,定容至1(试剂在2-8℃保存,有效期为一周)

3.2.4待测样品的配制

检测前用卧氏称量管称量所需酶,酶称量时,应至少称量10mg的酶,以保证称量的准确性。用酶稀释液溶解,定容到配制体积。

3.2.5 酶活检测步骤

岛津UV2450上的测定方法如下,按比例依次加入以下试剂:1ml的试剂10.02ml的酶液,37预热60秒后加入0.2ml试剂2,反应1分钟后,在340nm测定反应1分钟内吸光度的变化率。此法酶的线性为(100-1000 U /L,建议检测时用(500-1000U/L之间的标本进行检测。

3.2.6 酶活力计算公式

 

酶活力(U/LA/min×Vt× D×1000  =A/min×9807×D

ε×Vs×d

Vt

:反应液总体积(ml

ε

:摩尔吸光系数 6.22 cm2/micromole

Vs

:待测酶液的体积(ml

d

:比色杯光径(cm

D

:稀释倍数

A/min

A/min(待检样品) A/min(空白)(单位:ABS/min

 

酶比活力(U/mg=

 

三、附图    

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