嘌呤核苷磷酸化酶

一、产品介绍

二、酶活测定方法

1.     原理

2. 酶活定义

1个酶活单位等于在以下反应条件下1分钟生成1微摩尔过氧化氢所用的酶量。

3. 检测方法

3.1  样品稀释液的配制

在800毫升去离子水中，加入13.6克磷酸二氢钾搅拌溶解、用氢氧化钾溶液调节pH到7.50（25℃），加0.744克EDTA.2Na搅拌溶解，加胆酸钠0.14克搅拌溶解，加叠氮钠1克溶解，用氢氧化钾调节pH到7.50（25℃），定容至1升。

3.2酶活检测试剂配制方法

3.2.1试剂1的配制

在800毫升去离子水中，加入13.6克磷酸二氢钾，0.744克EDTA·2Na搅拌溶解，用氢氧化钾调节pH=7.50（25℃），加入0.14克胆酸钠搅拌溶解，加0.24克4－氨基安替吡啉搅拌溶解，调节pH到7.50±0.05（25℃），加4KU的黄嘌呤氧化酶搅拌溶解，加1克叠氮钠搅拌溶解，定容到1升，再次测量并调节使得pH=7.50±0.05（25℃）。

3.2.2试剂2的配制

在800毫升去离子水中，加入7.8克二水磷酸二氢钠、11.4克磷酸氢二钾搅拌溶解， 调节pH=7.7（25℃），加入3.22克次黄苷搅拌溶解，加2.8克苯酚、1克叠氮钠搅拌溶解，调节pH至7.70±0.05（25℃）。称过氧化物酶10kU搅拌溶解，定容到1升，测定并微调节pH=7.70±0.05（25℃）

3. 2.3待测样品的配制

检测前用卧氏称量管称量所需酶，酶称量时，应至少称量10mg的酶，以保证称量的准确性。用酶稀释液溶解，定容到配制体积。酶样本溶液在室温稳定1.5小时后在2小时内完成测定。

3.3 酶活检测步骤

按照比例加入下列试剂：0.75ml试剂1，0.15ml的试剂2，37℃预热300秒，加入0.015ml待检样品迅速搅拌均匀。在505nm测定1分钟内吸光度的变化率。建议检测时用200-300U/L之间的标本进行检测。

3.4 酶活力计算公式

酶活力（U/L）=  △A/min×Vt× D×1000  =△A/min×4586×D

ε×Vs×d

 三. 附图