丙酮酸激酶

一、产品介绍

二、酶活测定方法

1. 原理

2. 酶活定义

1个酶活单位等于在以下反应条件下1分钟氧化1微摩尔NADH所需的酶量。

3. 检测方法

3.1 样品稀释液的配制

    在pH7.5的50mM的Tris-HCl缓冲液中加入BSA（牛血清白蛋白）使其浓度达到1克/升。

3.2 酶活检测试剂配制方法

3.2.1 试剂1的配制

在800毫升去离子水中，渐次加入并溶解18.2克的三乙醇胺、5.4克六水氯化镁、3.24克氯化钾、8.8克的ADP·K（ADP的钾盐）、8.06克的磷酸烯醇式丙酮酸三环己胺盐，用盐酸调节pH到7.6（25℃），加入10KU乳酸脱氢酶缓慢搅拌溶解定容至1升，配制必须在1小时内完成，4小时内检测完。

3.2.2试剂2的配制

在800毫升去离子水中，加入4.84克的Tris，搅拌至完全溶解，然后用盐酸调节pH到9.0（25℃），再加入0.8克NADH，搅拌至完全溶解，定容至1升。此试剂用0.22μm的膜过滤除菌，2-8℃可保存两周。

3.2.3待测样品的配制

检测前用卧氏称量管称量所需酶，酶称量时，应至少称量10mg的酶，以保证称量的准确性。在冰水浴中用酶稀释液溶解，定容到配制体积。

3.3 酶活检测步骤

按比例依次加入以下试剂：0.9ml的试剂1，0.3ml的试剂2，37℃预热90秒，加0.04ml待检样品，预温160秒后，在340nm测定1分钟内吸光度的变化率。此法的线性范围为300-1000U/L。

3.4 酶活力计算公式

酶活力（U/L）=  △A/min×Vt× D×1000  =△A/min×4984×D

ε×Vs×d

 三. 附图