α-葡萄糖苷酶

一、产品介绍

二、酶活测定方法

1.     原理

     PNP在405nm处有特异吸收，通过测定在405nm处吸光度的变化速率计算该酶的活性。

2. 定义

1个酶活单位是指在以下反应条件下1分钟生成1微摩尔PNP的酶量，表示为1个单位。

3. 检测方法

3.1  样品稀释液的配制

在800毫升去离子水中，加入27.2克磷酸二氢钾，用氢氧化钾调节pH=7.0（25℃）左右，加0.37克EDTA.2Na、3.00克Thesit、1.00克叠氮钠搅拌溶解，用氢氧化钾或盐酸调节pH=7.0±0.05（25℃），定容至1升。

3.1  酶活检测试剂的配制

在800毫升去离子水中，加入13.6克磷酸二氢钾、用氢氧化钾调节pH=7.0（25℃）左右，加1.50克“4-Nitrophenyl-a-D-gluco-pyranoside”、1克叠氮钠，搅拌溶解，调节pH=7.0±0.05（25℃），定容至1升。

3.3待测样品的配制

检测前用卧氏称量管称量所需酶，酶称量时，应至少称量10mg的酶，以保证称量的准确性。用酶稀释液溶解，定容到配制体积。

3.4 酶活检测步骤

按以下要求加入试剂：检测试剂0.900ml，37℃预热60秒，加入0.018ml待检样品，迅速搅拌均匀，1分钟后，在 405nm 测定180-240秒内吸光度的变化率。此法酶的线性为100-800U/L，建议检测时用200-400U/L之间的标本进行检测。

3.5 酶活力计算公式

酶活力（U/L）=  △A/min×Vt× D×1000  =△A/min×2818×D

ε×Vs×d

三. 附图