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尿酸酶

尿酸生化试剂盒原料UricAcidAssayKitMaterial
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产品描述
产品参数
英文名称
Uricase
缩写
UA
货号
AA0040B
规格
规格可定制

 

一、产品介绍

外观:

白色微黄无定形粉末

比 活 性:

≥1.0U/mg

稳 定 性:

-20至少稳定一年

分 子 量:

大约31KD

等 电 点:

8.4

米氏常数:

1.6×10-6M

抑 制 剂:

不受叠氮钠的抑制

pH稳定性

6.510         Fig.3-1

最 适 pH

8.59.5         Fig.3-2

最适温度:

大于60       Fig.3-3

热稳定性:

50以下稳定    Fig.3-4

二、酶活测定方法

1.     原理

  

2. 酶活定义

1个酶活单位等于在以下反应条件下1分钟生成1微摩尔过氧化氢(1/2微摩尔醌染料)的酶量。

3. 检测方法

3.1  样品稀释液的配制

800毫升去离子水中,加入2.3磷酸二氢钾、22.8磷酸氢二钾,搅拌溶解,用氢氧化钾调节pH7.60,加1牛血清白蛋白、1叠氮钠,搅拌溶解,用氢氧化钾调节pH=7.60±0.05(25),定容至1。试剂存放在2-81周内有效。

3.2  酶活检测试剂配制方法

3.2.1 试剂1的配制

800毫升去离子水中,加入6.06Tris,搅拌溶解,用盐酸调节pH8.50,加6.0苯酚、0.3462EDTA·2Na1叠氮钠,搅拌溶解,用盐酸调节pH8.50±0.0525),定容到1,再次确认pH=8.50±0.0525),若偏离,微调至此值。此试剂2-8存放,2周内有效。

3.2.2试剂2的配制

700毫升去离子水中,加入0.8碳酸锂、30.1十二水合磷酸氢二钠搅拌溶解,加0.884草酸(用少量水提前溶解后投入)、加2.5二水合磷酸二氢钠搅拌溶解,用盐酸调节pH=7.50,加0.25尿酸搅拌溶解,加2.344-氨基安替吡啉,搅拌溶解、加6.0kU过氧化物酶搅拌溶解,加1叠氮钠搅拌溶解,调节pH=7.50±0.0525℃),定容至1

3.2.3待测样品的配制

检测前用卧氏称量管称量所需酶,酶称量时,应至少称量10mg的酶,以保证称量的准确性。用酶稀释液溶解,定容到配制体积。

3.3 酶活检测步骤

按比例依次加入以下试剂:0.5ml的试剂1,加上2.5ml的试剂237预热60秒,4分钟后加待测酶液0.03ml2分钟后,在505nm测定1分钟内吸光度的变化率。此法酶的线性为400-600U/L,建议检测时用400-600U/L之间的标本进行检测。

3.4 酶活力计算公式

 

酶活力(U/LA/min×Vt× D×1000  =A/min×15188×D

0.5×ε×Vs×d

Vt

:反应液总体积 ml

ε

:摩尔吸光系数 13.3  cm2/micromole

Vs

:待测酶液的体积  (ml)

d

:比色杯光径  (1cm)

D

:稀释倍数

A/min

A/min(待检样品) A/min(空白)(单位:ABS/min

 

 . 附图   

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