尿酸酶

一、产品介绍

二、酶活测定方法

1.     原理

2. 酶活定义

1个酶活单位等于在以下反应条件下1分钟生成1微摩尔过氧化氢（1/2微摩尔醌染料）的酶量。

3. 检测方法

3.1  样品稀释液的配制

在800毫升去离子水中，加入2.3克磷酸二氢钾、22.8克磷酸氢二钾，搅拌溶解，用氢氧化钾调节pH到7.60，加1克牛血清白蛋白、1克叠氮钠，搅拌溶解，用氢氧化钾调节pH=7.60±0.05(25℃)，定容至1升。试剂存放在2-8℃，1周内有效。

3.2  酶活检测试剂配制方法

3.2.1 试剂1的配制

在800毫升去离子水中，加入6.06克Tris，搅拌溶解，用盐酸调节pH到8.50，加6.0克苯酚、0.3462克EDTA·2Na、1克叠氮钠，搅拌溶解，用盐酸调节pH到8.50±0.05（25℃），定容到1升，再次确认pH=8.50±0.05（25℃），若偏离，微调至此值。此试剂2-8℃存放，2周内有效。

3.2.2试剂2的配制

在700毫升去离子水中，加入0.8克碳酸锂、30.1克十二水合磷酸氢二钠搅拌溶解，加0.884克草酸（用少量水提前溶解后投入）、加2.5克二水合磷酸二氢钠搅拌溶解，用盐酸调节pH=7.50，加0.25克尿酸搅拌溶解，加2.34克4-氨基安替吡啉，搅拌溶解、加6.0kU过氧化物酶搅拌溶解，加1克叠氮钠搅拌溶解，调节pH=7.50±0.05（25℃），定容至1升。

3.2.3待测样品的配制

检测前用卧氏称量管称量所需酶，酶称量时，应至少称量10mg的酶，以保证称量的准确性。用酶稀释液溶解，定容到配制体积。

3.3 酶活检测步骤

按比例依次加入以下试剂：0.5ml的试剂1，加上2.5ml的试剂2，37℃预热60秒，4分钟后加待测酶液0.03ml，2分钟后，在505nm测定1分钟内吸光度的变化率。此法酶的线性为400-600U/L，建议检测时用400-600U/L之间的标本进行检测。

3.4 酶活力计算公式

酶活力（U/L）=  △A/min×Vt× D×1000  =△A/min×15188×D

0.5×ε×Vs×d

 三. 附图